Absztrakt 1980 Nefrológiai platform, vasárnap, 5/2
Csökkent vizelet-citrát kiválasztás, a vesekő egyik fontos oka, CMA vagy hypokalaemia (alacsony K) esetén fordul elő. A mikroperfúziós vizsgálatok kimutatták, hogy a vizelet-citrát fő szabályozása a proximális tubuláris citrát újrafelszívódása. A citrát oxaloacetáttá és acetil-CoA-val való hasításáért felelős ATP CL fontos szerepet játszik a hipocitraturia kialakulásában (J Clin Invest 98: 2381). A CMA és az alacsony KK növeli az ATP CL és a fehérje aktivitását a vesekéregben. Az a konkrét cső alakú szegmens azonban, ahol ez a növekedés bekövetkezik, nem ismert. Ezenkívül kimutatták, hogy egy specifikus ATP inhibitor CL, a 4S-hidroxi-citrát adagolása növeli a citrátot. Ezeknek a vizsgálatoknak az volt a célja, hogy azonosítsák a vese azon részét, amely felelős a kortikális ATP CL fehérje megfigyelt növekedéséért, és megvizsgálják a 4S-hidroxi-citrát hatását az ATP CL aktivitására és bőségére.
180-220 g hím patkányokat önálló metabolikus ketrecekbe tettek. A kontrollállatok ad lib vizet kaptak és patkánytollak voltak párokkal etetve, a kísérleti állatok 0,28 M NH 4Cl vizet kaptak, ad lib. 7 nap elteltével az állatokat 300 torr nyomáson 3% paraformaldehiddel és 0,05% pikrinsavval mossuk 0,1 M kakodilátpufferben, 10% Pentaspan®-nal (DuPont). A vese szakaszokat 10% formalinban rögzítettük, és 3 μ szakaszokra vágtuk. Az immunoperoxidáz jelölését egy Vectastain® ABC kit (Vector Laboratories, Kalifornia) segítségével végeztük. Az immunoblotoláshoz korábban használt primer nyúl anti-patkány antitestet 1: 200 hígításban alkalmaztuk.
Az ATP CL inhibitor alkalmazásával végzett vizsgálatokhoz patkányoknak normál patkányokat és NH 4 Cl vizet adtak, ad lib. 7 nap elteltével az állatoknak 2 mmol/kg/nap dózist adunk be CitrinK-Mg®-vel (Sabinsa, New Jersey). 2 nap múlva az állatokat leöltük és perfúzióval láttuk el, a fent leírtak szerint. Az egyik vese szorítása és eltávolítása a perfúzió előtt az ATP CL aktivitás és a fehérje szintjének meghatározása volt.
Immunhisztokémiai eredményeink azt mutatták, hogy az ATP CL fehérje a nephronban található. A CMA-val rendelkező állatoknál azonban a festés háromszorosára nőtt csak a tubulusok proximális szegmensében, különösen az ecset szélén. Az ATP CL gátlóval kezelt állatkísérletek során a vizelet-citrát ötszörösére nőtt. Azonban nem volt különbség a CL ATP aktivitásában (nmol hidroxamát/mg fehérje/30 perc; 132 ± 16 vs. 134 ± 14) vagy az ATP CL fehérjében immunblottolással. Összegzésképpen elmondható, hogy az ATP CL in vivo 4S-hidroxi-citráttal történő gátlása in vivo nem tart fenn. Immunhisztokémiai úton az ATP CL fehérje a nephron egész területén megtalálható. A CMA patkányokban megfigyelt proximális tubuláris ATP CL immunfestés növekedése további bizonyítékot szolgáltat ennek az enzimnek és ennek a tubuláris szegmensnek a jelentőségére a hypocitraturia kialakulásában.