tumor

  • absztrakt
  • bevezetés
  • az eredmény
  • HTNF expresszió- a gemcitabin indukálta AdEgr.TNF.11D-vel fertőzött humán hasnyálmirigyrák sejtekben
  • Az AdEgr.TNF.11D és a gemcitabin kombinált kezelése növeli a tumor növekedésének késleltetését az emberi hasnyálmirigyrák modellekben
  • Az AdEgr.TNF.11D és a gemcitabin kombinációs terápia jól tolerálható
  • vita
  • Összeférhetetlenség

absztrakt

A hasnyálmirigy-adenokarcinóma olyan betegség, amelyet késleltetett megjelenés, alacsony resectability a kezelés alatt, korai terjedés és rossz prognózis jellemez. Az előrehaladott hasnyálmirigyrákban szenvedő betegek összesített ötéves túlélése kevesebb, mint 2%. 1 1997 óta a gemcitabin az elõrehaladott hasnyálmirigyrákban szenvedõ betegek standard ellátása. Egy kis, randomizált, III. Fázisú vizsgálatban a gemcitabinnal kezelt hasnyálmirigyrákos betegek 18% -a 1 évig élte túl az akkori szokásos ellátást (5-fluorouracil). 2 Sürgős és kielégítetlen szükség van új terápiákra ennek a nagyon kihívást jelentő emberi rosszindulatú daganatnak.

A gemcitabin daganatellenes aktivitása a tumorsejtek sejtfázis-specifikus elpusztításának tulajdonítható, valamint a sejtciklus G1/S fázis általi előrehaladásának gátlásával. Pontosabban, a gemcitabin intracellulárisan metabolizálódik, és két metabolithoz vezet: difoszfát és trifoszfát nukleozidokhoz. Mindkét metabolit zavarja a DNS 3 szintézisét és gátolja a sejtek növekedését. Ezenkívül a gemcitabin intracelluláris reaktív oxigénfajok indukálásával indukálja az apoptózist az emberi hasnyálmirigyrák sejtjeiben. 4

Kísérleti koncepciónk szerint az AdEgr.TNF.11D (más néven TNFerade biologic) gemcitabin hozzáadása egy erős humán tumor nekrózis faktor alfa (hTNF-α) fehérjét használ. A HTNF-a nekrotikus aktivitást mutatott a legkülönbözőbb rákos sejtekben, szelektív apoptotikus aktivitást mutatott a tumor érrendszerére, és distalis hatásai lehetnek, amelyek elnyomják az áttétet. 5, 6

Az apoptózis kiváltása a hTNF-α közvetlen citotoxicitásának valószínű elsődleges mechanizmusa, és valószínűleg a legtöbb sejttípuson jelen lévő TNFRI receptor közvetíti. Az 5 hTNF-α apoptózist indukál a tumorral társult endothelsejtekben, és érzékenyíti a tumorsejteket a 7-es sugárzásra és a kemoterápiás gyógyszerre. 8 Mivel a hTNF-α és a gemcitabin különböző mechanizmusokkal rendelkezik a rák növekedésének gátlásában, feltételezzük, hogy a hTNF-α és a gemcitabin kombinációja önmagában mindkét szer daganatellenes hatását javítja.

A preklinikai vizsgálatok kimutatták, hogy a konstitutív promoter irányítása alatt álló hTNF-α adenovírusvektor, bár sikeres a részleges és teljes tumor regresszió előállításában, mégis jelentős szisztémás aktivitást eredményez. A szisztémás aktivitás megkerüléséhez adenovirális vektort használtunk, hTNF-α-val, AdEgr.TNF.11D (TNFerade) kémiailag vagy sugárzás által indukálható promóterrel. A TNFerade, egy adenovírus fehérje expressziós rendszer alkalmazásával a hTNF-a közvetlenül beadható a tumorban. Ez lokálisan magas hTNF-α koncentrációhoz vezet a tumorban, és korlátozza az általános keringési rendszerbe felszabaduló hTNF-α mennyiségét. Ezt a megközelítést alkalmazva a hTNF-α citotoxikus aktivitása elsősorban a tumorra korlátozódik, miközben a nem célszövetek konzerválódnak. 10, 11

Jelenleg folyamatban van egy III. Fázisú vizsgálat az AdEgr.TNF.11D alkalmazásával, és a metasztatikus betegség diagnosztizálása nélküli, hasadhatatlan hasnyálmirigy-betegségben szenvedő betegek besugárzása. A vizsgálat kezdeti eredményei (n = 51 szabadalom) azt sugallják, hogy az AdEgr.TNF.11D kombinált kemoradioterápiával kombinálva meghosszabbíthatja a betegek túlélését. Ezen biztató klinikai eredmények és a gemcitabin tumorellenes aktivitása alapján azt javasoljuk, hogy a hTNF-α gemcitabinhez történő hozzáadása további terápiás előnyökkel járhat előrehaladott hasnyálmirigyrákban szenvedő betegek számára. Itt megmutatjuk, hogy az AdEgr.TNF.11D és a gemcitabin kombinációja erősebb tumorellenes aktivitást produkál humán hasnyálmirigy-modellekben, mint bármelyik anyag önmagában.

az eredmény

Gemcitabin által kiváltott hTNF-α expresszió AdEgr.TNF.11D-vel fertőzött humán hasnyálmirigyrák sejtekben

Korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy klinikailag jóváhagyott kemoterápiás szerek, a ciszplatin, az 5-fluorouracil, a paclitaxel, a ciklofoszfamid és a gemcitabin képesek kiváltani az AdEgr.TNF.11D-ben található Egr-1 promotort és kontrollálni a hTNF-α expressziót emberi vastagbél és vastagbél rákos sejtekben. . Ezért megvizsgáltuk az AdEgr.TNF.11D gemcitabin általi indukálhatóságát három humán hasnyálmirigy-karcinóma sejtvonalban (MiaPaca2, Panc1 és AsPC1). Az emberi hasnyálmirigyrák sejteket AdEgr.TNF.11D-nek (100 MOI) tettük ki, majd gemcitabin-kezelést követett az 1. ábra jelmagyarázata szerint. A TNF-α koncentrációkat a hTNF-α-ra specifikus ELISA-val határoztuk meg. Három különböző hasnyálmirigyrákos sejtvonal adatai azt mutatják, hogy az AdEgr.TNF.11D gemcitabin által indukálható volt, a mintákban a gemcitabin dózisának növekedésével nőtt a hTNF-α szintje. A válasz a MiaPaca2 és a Panc1 sejtvonalakon volt a legnagyobb, a hTNF-α maximális szintjét az 1 gg-1 gemcitabin dózisnál figyelték meg. A mért hTNF-α 28-szorosára nőtt a MiaPaca2-ben és 9-szeresére a Panc1-ben. Hasonló dózisválasz figyelhető meg az AsPC1 hasnyálmirigy-hasnyálmirigy-karcinóma sejtvonalban, bár a válasz alacsonyabb volt (az adatokat nem közöltük).

Teljes méretű kép

Az AdEgr.TNF.11D és a gemcitabin kombinált kezelése növeli a tumor növekedésének késleltetését az emberi hasnyálmirigyrák modellekben

Megállapítottuk, hogy az AdEgr.TNF.11D önmagában (TNFerade) vagy a gemcitabin önmagában, vagy az AdEgr.TNF.11D és a gemcitabin kombinációjával statisztikailag szignifikáns (P = 0,05) hatást gyakorolt ​​a tumor térfogat növekedési sebességére a önmagában vivőanyag-kontrollhoz képest. Az AdEgr.TNF.11D kifejezettebb hatást fejtett ki (P = 0,05), mint egy kezelés, önmagában a gemcitabinnal összehasonlítva. A kombinált kezelés hatása magasabb volt, mint a csak a gemcitabiné, és szignifikáns volt (P = 0,05). Figyelemre méltó, hogy a kombinációs terápia nagyobb hatást fejtett ki, mint önmagában az AdEgr.TNF.11D, és a gemcitabin nem csökkentette az AdEgr.TNF.11D tumorellenes aktivitását. Biológiailag ezért a kombináció a vizsgált dózisokban jobb volt, mint az egyik anyag önmagában történő alkalmazása, bár statisztikailag nem találták, hogy a kombináció additív vagy szinergikus lenne. Ezekhez a vizsgálatokhoz a gemcitabin átlagos dózisát 120 mg kg -1-nek alkalmaztuk, szemben az állati modellekben intravénásan alkalmazott 240 mg kg -1 adaggal. 16 Ez heti ∼ 362 mg m -2 -nek felel meg, míg a hasnyálmirigyrákban szenvedő betegek klinikai dózisa heti 1000 mg m -2.

Az AdEgr.TNF.11D és a gemcitabin kombinációs terápia jól tolerálható

A kezeléssel összefüggő toxicitás kimutatható jeleit (pl. A bőr elszíneződése, letargia, bőrfekélyedés és rendellenes viselkedési aktivitás) nem figyelték meg. A testsúlyt a toxicitás indikátoraként figyeltük a kísérlet során. Ennél nagyobb átlagos fogyást nem találtunk az AdEgr.TNF.11D-ben vagy a vivőanyagban vagy a kontroll vektorban. A testtömeg növekedését azonban csak a gemcitabin, a gemcitabin és az AdEgr.TNF.11D kombinációja esetén figyelték meg; ez a műtét és a gyógyszerek kombinációjának hatásának tulajdonítható. Az AdEgr.TNF.11D gemcitabinnal történő egyidejű alkalmazása átlagosan 8% -os súlyvesztést eredményezett 25 nap alatt (3a. És b. Ábra), és jól tolerálták. A kezeléssel összefüggő halálesetek egyik csoportban sem voltak.

Hasnyálmirigyrákos egerek testsúlyának változása. Emberi hasnyálmirigy daganatok, ( a ) MiaPaca2 vagy ( b ) Az AsPC1-et az atmikus meztelen egerek jobb hátsó végtagjában határoztuk meg. A kezelést megkezdték, és a toxicitást mérik a testtömegre. A testtömeg> 20% -ának megfelelő veszteséget mérgezőnek tekintették. A testtömeg változását a kezdeti testtömeg százalékában fejezzük ki. Átlagok ± sd (n = 8). Jelentős súlycsökkenést nem figyeltek meg. A kezeléssel összefüggő halál egyik csoportban sem volt. Ezek az adatok arra utalnak, hogy a gemcitabin AdEgr.TNF.11D-vel történő beadását jól tolerálták.

Teljes méretű kép

vita

Az AdEgr.TNF.11D-t elsősorban állatmodellekben vizsgálták, besugárzással kombinálva. 6, 17, 18, 19, 20 A mai napig tesztelt számos rákmodellben, ideértve a nyelőcsövet, a fejet és a nyakat, a melanomát, a vastagbél adenokarcinómáját és a gliomát, a besugárzás képes kiváltani és szabályozni a hTNF-α fehérje expresszióját az Egr-1-ből. . dózisfüggő promóter. Ezenkívül azáltal, hogy a sugárzást a tumorba irányítja, és az AdEgr.TNF.11D-t közvetlenül a tumorba juttatja, a hTNF-α termelés szelektíven a tumorra korlátozódik, és a hTNF-α normál szövetekre gyakorolt ​​hatásos citotoxikus hatása lényegesen csökken.

A cikk adatai azt mutatják, hogy a gemcitabin, a hasnyálmirigyrák kezelésében általánosan használt anyag, serkentheti a hTNF-α fehérje termelését is az Egr-1 promoterből. Humán hasnyálmirigy-rákos sejtekkel végzett in vitro vizsgálatok kimutatták, hogy a gemcitabinnal történő inkubálás 1-10 μg ml -1 vagy kb. 3,3-30 μM dózisban, ami összehasonlítható a gemcitabint alkalmazott emberek plazmakoncentrációival (15-25 μM) stimulált hTNF. - a fehérjetermelés olyan szintre, amely magasabb vagy magasabb, mint a besugárzás során tapasztalt szint. Adataink megerősítik Weichselbaum és mtsai. 13, 14 munkáját, amely azt mutatta, hogy számos kemoterápiás szer képes "bekapcsolni" az Egr-1 promótert. Az AdEgr.TNF.11D-ben az Egr-1 promóter gemcitabin általi aktiválását legalább részben közvetíti az intracelluláris reaktív oxigéngyök szignálok indukciója, amelyek az Egr-1 promóterben a CArG motívumot célozzák meg, ami hTNF termeléséhez vezet. -α. Teszteltük a gemcitabin alkalmazását a hTNF-α expressziójának szabályozásának fokozására, és mérsékelt dózisú 120 mg kg-1 gemcitabint alkalmaztunk az intravénásan adott 240 mg kg-1-hez képest 16 azt találtuk, hogy a gemcitabin és AdEgr .NN kombinációja. A 11.11 a késleltetett tumor növekedését jobban késlelteti, mint bármelyik reagens.

Összeférhetetlenség

Murugesan, Dr. King, Mr. Osborn, Dr. Thornton és Dr. Wei jelenleg vagy a GenVec Inc. alkalmazottai, Dr. Fairweather független tanácsadó és Dr. O'Reilly munkatárs.