pentozán-poliszulfát

  • absztrakt
  • A fő
  • AZ EREDMÉNYEK
  • A megállapított érelmeszesedéses elváltozások eljárása
  • Plazma lipidek
  • Az MMP és a TIMP aktivitása aorta kivonatokban Ex Vivo
  • MMP aktivitás monocitákban in vitro a Ex Vivo
  • TNFa - indukálta az NF-κB és MAPK aktivációját
  • VITA

absztrakt

A fő

A heparin és a heparinszerű molekulák csökkentik a sejtproliferációt, növelik az extracelluláris mátrix nettó termelését több sejttípusban, és csökkentik a mátrix metalloproteinázok (MMP) szekrécióját in vitro. 1, 2, 3, 4 A makrofágból származó habsejtek ateroszklerotikus plakkokban való felhalmozódása korrelál a tumor nekrózis faktor α (TNFα) és az MMP, 5, 6 fokozott felszabadulásával, amely befolyásolhatja az érrendszer átalakulását és a lepedék felrepedését, ezáltal felgyorsítva az akut szövődményeket, például instabil angina pectoris és akut miokardiális infarktus. 7, 8, 9, 10, 11

A pentozán-poliszulfát (PPS) egy orális heparinoid-szerű készítmény, amely lényegében nem rendelkezik antikoaguláns aktivitással, és az interstitialis cystitis kezelésére engedélyezett. Korábban azt tapasztaltuk, hogy a PPS kezelés megakadályozza a krónikus gyulladásos és szövettani elváltozások kialakulását 5/6 nephrectomizált patkányban. 13 Azt is megállapítottuk, hogy a PPS in vitro csökkenti a mesangiális sejtek, 14 vaszkuláris graftból származó emberi vaszkuláris simaizom sejt, 15 és prosztata interstitiumból nyert sima izom sejtek szaporodását. Ezenkívül a PPS fokozza az MMP-2 szekréciót és stimulálja a szöveti metalloproteináz inhibitor (TIMP) -1 termelését és a TIMP-3 szekrécióját a mesangiális sejtfelületről. 14

Ebben a tanulmányban megvizsgáltuk az orális PPS kezelés hatását a megállapított ateroszklerotikus elváltozások előrehaladására heranabe örökölt hiperlipidémiás (WHHL) nyulakban. 17 A PPS hatását bizonyított ateroszklerotikus elváltozásokra vizsgáltuk, mint a PPS hatékonyságának klinikailag legjelentősebb és legszigorúbb tesztjét.

AZ EREDMÉNYEK

A megállapított érelmeszesedéses elváltozások eljárása

Az ateroszklerotikus elváltozások elemzése heranabikus örökletes hiperlipidémiás (WHHL) nyulakban. Az állatokat 75 napig magas koleszterinszintű (HC) táplálékkal etették. 45 nap elteltével két csoportba sorolták őket, az egyik pentozán-poliszulfátot (PPS) (napi 30 mg/testtömeg-kg) ivóvízben, a másik pedig csak csapvizet kapott, az Anyagok és módszerek részletek szerint., a a b ) Az aorta belső felületének reprezentatív fényképei 75 napos HC-diéta után. A képeket 4% foszfáttal pufferolt formaldehid oldattal rögzített perfúziós nyulakból frissen kivágott aortákból nyertük (csoportonként öt). a ) HC-diéta 75 napig plusz csapvíz. ( b ) HC-diéta 75 napig, a 45. napon PPS-t adtunk az ivóvízhez, és további 30 napig folytattuk. ( c ) A WHHL-nyulak ateroszklerotikus elváltozásainak számszerűsítése WHHL-nyulak arcelemzésével. Az aterikus érelmeszesedést az aorta eredet és a vese közötti intim elváltozás területének (elváltozás területe/teljes felület) százalékában értékeltük. * P * P ** P

Mátrix metalloproteináz (MMP) aktivitás monocitákban - makrofágokban. A humán U937 pro-monocita sejteket vagy a humán perifériás vérből származó monocitákat (PBM) 10% magzati szarvasmarha-szérummal (FBS) kiegészített RPMI-táptalajban 10 ng/ml tumor nekrózis faktor α-val (TNFα) stimuláltuk jelenlétében vagy távollétében. pentozan-poliszulfátot (PPS) (100 μg/ml) vagy heparint (100 μg/ml), 37 ° C-on 3 órán át, majd 0,1% szarvasmarha-szérumalbumin (BSA) nélküli táptalajban 16 órán át -18 órán át inkubáljuk anyagokban és módszerekben. a ) Az U937 sejtek felülúszóinak reprezentatív zimográfiai elemzése. ( b Az MMP-2 aktivitást a stimulálatlan U937 sejtek felülúszójában denzitometriával határoztuk meg. Nyitott sáv, módosítatlan; megtöltött rúd, 100 μg/ml PPS-sel kezeljük. Az adatokat a kontroll százalékában fejezzük ki (stimulálatlan U937 sejtek). Öt független kísérlet átlagai ± fél látható. ** P * P ** P * P ** P

Mitogén-aktivált protein-kináz (MAPK) modulálása és a nukleáris faktor-κB (NF-κB) aktiválása RAW-sejtekben. ( a A RAW sejteket tumor nekrózis faktorral (TNFα) (10 ng/ml) kezeltük pentozán-poliszulfát (PPS) (400 μg/ml) jelenlétében vagy hiányában, majd foszforilált és összes JNK, IκB és p38 szintet határoztunk meg Western-blotokkal. . Ugyanezeket a membránokat teszteltük ß-aktinnal a fehérjetartalom értékeléséhez. P-JNK, piK, p-p38 relatív expressziója β-aktinon ( b - d ); # P * P ¶ P 13, 24, 25 Ezért arra a következtetésre lehet jutni, hogy a WHPS nyulakban a PPS kezelés által kiváltott ateroszklerózis progresszió gátlását nem a vérnyomásszint csökkenése közvetíti.

A ateroszklerózis kezelésére korábban heparin és heparinszerű molekulák alkalmazását javasolták. 1 A parenterális alkalmazás követelménye azonban csak erre a javallatra korlátozza alkalmazását, amely nem vonatkozik a TSO-kra. Az orális PPS-t széles körben használják az interstitialis cystitis kezelésére. Nagyon kevés mérgező mellékhatása van, még akkor is, ha hosszabb ideig adják. A PPS kezelése megakadályozza a glomeruláris és vaszkuláris elváltozások, valamint a tubulointerstitialis gyulladás és a fibrózis kialakulását streptozotocin által kiváltott cukorbetegségben, 27 bGH transzgénikus egérben, 27 és nephropathiás A patkányokban. 28 vagy 5/6 ciklosporin A, 13 csökkenti a gyulladásos arthritis tüneteit, 29 és myocardialis ischaemia/reperfúziós sérülés modellek. 30

A pontos mechanizmus, amellyel az átvitelirendszer-üzemeltetők elérik védőhatásait, még nem tisztázott. Megállapítottuk, hogy a PHL-kezelt WHHL-nyulak ateroszklerotikus plakkjai kevesebb makrofágot tartalmaztak, mint a vízzel kezelt kontrollok. Mások kimutatták, hogy a PPS és a heparin gátolja a komplement kaszkád aktiválódását, 31 megköti vagy kiszorítja a gyulladásos citokineket, 32 csökkenti az NF-KB aktivációt, 33 szabad gyököket szed, 31 és csökkenti a neutrofil adhéziót és beszűrődést. 30 Ezek a mechanizmusok közvetlenül hozzájárulhatnak a makrofágok toborzásának csökkentéséhez, valamint a plakkok fejlődésének és stabilitásának javításához.

Korábbi beszámolók korrelálták a megnövekedett MMP aktivitást a monocita-makrofágokkal az akut szövődmények kialakulásával, például a lepedék repedésével és a trombózissal. 5, 6, 7, 8, 9, 10, 33 Megállapítottuk, hogy a PPS gátolta mind az MMP-2, mind az MMP-9 enzimatikus aktivitást kétféle emberi monocitában, pro-monocita sejtvonalakban (U937 sejtek) és a normál önkéntesek PBM-jében. Ennek a hipotézisnek a további megerősítése érdekében tanulmányoztuk az MMP aktivitását indukált peritoneális makrofágokban, amelyeket PPS-szel orálisan kezelt egerekből nyertünk. Ezekben az állatokban a TNFα-stimulált MMP aktivitás a PPS kezelés után szignifikánsan csökkent a kontroll állatokhoz képest, ami arra utal, hogy ez a mechanizmus jelen lehet in vivo. Mivel az in vitro kísérletekben alkalmazott koncentrációk közel voltak az in vivo PPS orális beadása után elért plazmaszintekhez, 27 ennek a vegyületnek terápiás haszna lehet emberben ezekben a betegségekben. A PPS MMP-re kifejtett gátló aktivitása továbbra is szignifikáns volt, amikor a gyógyszert legfeljebb 3 órával a TNFα stimuláció után adták be.

Korábban kimutatták, hogy a gyulladásos mediátorok, például a TNFα aktív szerepet játszanak az érelmeszesedés előrehaladásában. Fontos mechanizmus, amellyel a TNFα fokozza a gyulladást, a pro-gyulladásos gének fokozott szabályozása a makrofágokban. 44 Mivel azt tapasztaltuk, hogy a PPS elnyomta a TNFα-stimulált IκB foszforilációt, az NF-KB transzkripciót és a p38 foszforilációt, lehetséges, hogy a PPS közvetlenül csökkentheti a TNFα által indukált TNF által indukált aktivitást és a TNFα által indukált AP-1-et. Az a megállapítás, hogy a PPS csökkenti a TNFα, MCP-1, ICAM-1 és CXCL-1 által stimulált iNOS mRNS expressziót a vese proximális tubuláris sejtjeiben és podocytáiban az NF-κB gátlásával, közvetve alátámasztja ezt az érvelést.

Így a PPS jótékony hatása a megállapított érelmeszesedéses elváltozásokra magában foglalhatja a kollagénszint stabilizálódását a plakkokban, az MMP és a TIMP aktivitásának modulációja révén, az atherosclerotikus plakkokba történő makrofág infiltráció csökkentését, valamint a csökkent NMP aktivitás és az NMP foszforiláció által megnyilvánuló monocita/makrofág gyulladás gátlását. 38. o.

A PPS emellett csökkenti az acetilezett kis sűrűségű lipoproteinek kötődését az endothel sejtekhez45, és szelektíven inaktiválja számos heparint kötő növekedési faktort. Ezenkívül a PPS negatív töltésű és hidrofil, két olyan tulajdonság, amely támogatja az endoteliális sejtek felszínén való lokalizálódását és a glycalyx "pajzsának" megőrzését. 31

Összegzésképpen elmondható, hogy a PPS kezelés orális beadása lelassítja a megállapított ateroszklerózis progresszióját WHHL nyulakban. Úgy tűnik, hogy a PPS hatása összefügg a gyulladáscsökkentő képességgel, ideértve a makrofágok beszivárgását is, és az MMP-k és a TIMP-ek aktivitását az ateroszklerotikus aorta falán belül úgy szabályozza, hogy a kollagén lerakódását, nem pedig a kollagén lebomlását részesítse előnyben. Ezek a tulajdonságok támogathatják a bevonat stabilitását. A PPS kezelés növelte az MMP-2 és TIMP aktivitást az érelmeszesedéses lepedékben, miközben gátolta az MMP-2 és MMP-9 aktivitását monocitákban/makrofágokban. További vizsgálatokra van szükség ezen megfigyelések relevanciájának értékeléséhez a megállapított ateroszklerózisban szenvedő betegek kezelésében.