jelátviteli

  • elemeket
  • absztrakt
  • bevezetés
  • Anyagok és metódusok
  • A szövetek forrása és kezelése
  • immunhisztokémia
  • Antitestforrás
  • az eredmény
  • A PDE2, PDE5, PDE11, cGKI, eNOS és vimentin immunolokalizációja emberi csiklóban
  • vita

elemeket

  • Sejtjelzés
  • izoenzimek
  • izom
  • Reproduktív biológia

absztrakt

Anyagok és metódusok

A szövetek forrása és kezelése

A hannoveri Orvostudományi Kar helyi etikai bizottságának előírásaival összhangban négy halott nő (18 és 42 év közötti) halála után 4-6 órán belül létrejött a klitoris szövet a közepétől a proximális részig. Az alanyoknak korábban nem ismertek szexuális diszfunkcióval kapcsolatos betegségek. Kivágás után a szövetmintákat azonnal jéghideg 4% formaldehid-oldatba helyeztük foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS; pH 7,4).

immunhisztokémia

A klitoris szövetmintákat 4 órán át 4% formaldehid PBS-ben (pH 7, 4) jéghideg oldatában történő merítéssel rögzítettük, és háromszor 24 órán át öblítettük 15% szacharózt tartalmazó jéghideg PBS-sel. A mintákat a Tissue-Tec-be (Miles Laboratories, Elkhart, IN, USA) tettük, majd -40 ° C-on izopentánban gyorsfagyasztottuk. A szövetet 8-10 μm vastag szeletekre vágtuk, és üveglapokon felolvasztottuk. A metszeteket 2 órán át PBS-ben inkubáltuk 0,2% Triton X-100 és 1% szarvasmarha szérum albuminnal kiegészítve, majd 24 órán át (szobahőmérsékleten) inkubáltuk primer antitestekkel (anti-eNOS, -sm α-aktin). PDE2, -PDE5, -cGK és -vimentin) megfelelő hígításban (anti-α-aktin: 1: 400, anti-eNOS: 1: 1000, anti-PDE2/PDE5: 1: 250, anti-cGK: 1: 250, anti-vimentin: 1:40). Miután a metszeteket PBS-sel leöblítettük, vagy fluoreszcein-izotiocianátot, vagy Texas Red-jelzett másodlagos antitesteket alkalmaztunk (1:80 és 1: 160 hígítások), és a metszeteket 2 órán át inkubáltuk. Ezután a metszeteket feniléndiaminnal kombináltuk. A vizualizációt lézermikroszkóppal kezdtük (Olympus, Tokió, Japán), és a képalkotást a ViewFinder Lite (2.0 verzió, Pixera, Egham, Egyesült Királyság) segítségével végeztük.

Antitestforrás

A PDE2A, PDE5A és PDE11A elleni antitesteket a FabGennix-től (Frisco, TX, USA) szereztük be, az anti-cGKI AB a Calbiochem-től (La Jolla, CA, USA), az α-simaizom aktin, -vimentin és - eNOS antitestek Sigma BioSciences (St. Louis, MO, USA). Texas Red-hez és fluoreszceinhez konjugált F (ab) 2 fragmenst a Jackson Immunoresearch Laboratories-tól (West Grove, PA, USA) szereztünk be.

az eredmény

A PDE2, PDE5, PDE11, cGKI, eNOS és vimentin immunolokalizációja emberi csiklóban

( a - f ) Lézeres fluoreszcens mikroszkópia: ciklikus guanozin-monofoszfát (GMP) kötő foszfodiészteráz (PDE) 2 (ciklikus adenozin-monofoszfát (AMP) PDE) expressziója, ciklikus GMP-vel stimulálva; a ), foszfodiészteráz (PDE) 5 (ciklikus GMP) PDE; b ) festett az α-simaizom aktinnal szemben ( c ), I. típusú protein-kináz (cGKI, ciklikus GMP-kötő protein-kináz; d ) és az endotheliális nitrogén-oxid szintáz (eNOS; e ) kis erekben, amelyek szétszórják a szubepitheliális teret és a clitoris corpus cavernosumot (nagyítás × 40). f ) Klitoris szöveti metszet mikrográfia, amely a PDE11A (kettős szubsztrát PDE) immunjelölését mutatja a sztrómában elhelyezkedő idegtörzsben (nagyítás × 100). Betűk betűkkel b ), d ), f ): kontrollfestés az elsődleges antitestek nélkül (nagyítás × 40).

Teljes méretű kép

( a - c ) Sejtek hasonlóak az ún intersticiális sejtek (IC), amelyek a gyűrűs guanozin-monofoszfát (GMP) kötő foszfodiészterázt (PDE) 2 (ciklikus adenozin-monofoszfát (AMP) PDE) specifikus immunszignálokat mutatják be az emberi csikló bazális epitéliumában. Nagyítás: × 10 ( a ), × 20 ( b ), × 100 ( c ). b ) A levélben látható bekeretezett terület fújt képe a ), c ) a levélben bemutatott keretes terület fújt képe b ). Beillesztés ide: b ): kontroll szín (nagyítás × 40).

Teljes méretű kép

a - c ) Részletek az emberi csikló bazális hámjából: interstitialis sejtszerű (IC) sejtek, amelyek gazdag foszfodiészteráz (PDE) immunfestést mutatnak sejttestükben és rostjaikban. Nagyítás: × 20 ( a ), × 100 ( b ). b ) IC-szerű sejt fújó képe a ). Vimentin kifejezés ( c ) a sejtben, hogy IC legyen a subepidermális rétegben (nagyítás × 100). Illessze be c ): kontroll szín (nagyítás × 40).

Teljes méretű kép

Asztal teljes méretben

vita

Bár úgy gondolják, hogy a csikló összefügg a szexuális izgalom és az orgazmus fázisának női normális fejlődésével, nagyon kevés tanulmány vizsgálta ennek a nemi szervnek az élettanát. 5, 6, 7 Ezen eredmények alapján felvetették az NO/ciklikus GMP rendszer szerepét a női szexuális izgalom folyamatában. Megállapították a ciklikus AMP és a GMP és PDE ciklikus izoenzimek központi szerepét a különféle szöveti funkciók szabályozásában, és farmakológiai koncepciója a szöveti ciklikus nukleotidszintek növeléséről, például szelektív PDE inhibitorokkal, a betegségek kezelésében. Az urogenitális traktus), vizeletinkontinencia, tünetek ún jóindulatú prosztata szindróma, beleértve az alsó húgyúti tüneteket és a hólyag kivezetésének elzáródását. 18, 19, 20 Annak a hipotézisnek az alapján, hogy a nők szexuális stimulációjára adott választ részben ugyanazok a biológiai utak közvetítik, mint a férfiaknál, azt fontolgatták, hogy a PDE-gátlók alkalmazása megkönnyítheti-e a nők nemi szerveit is. simaizom relaxáció, ami javítja a szubnormális izgalmat. 21

Végül az eredmények alátámasztják a GMP és a kapcsolódó ciklikus cGMP-kötő fehérjék, például PDE2, PDE5 és cGKI ciklikus szignalizációjának szerepét a klitorális áramlás szabályozásában. Ezenkívül valószínűnek tűnik, hogy a PDE2 és a PDE11 is részt vesz a lokális (neuro) transzmisszió mechanizmusában a csiklóban.