izokalórikus

  • absztrakt
  • A fő
  • ANYAGOK ÉS METÓDUSOK
  • Az állatok gondozása és gondozása.
  • 1. kísérlet.
  • 2. kísérlet.
  • Az anyatejtermelés és az anyatejbevitel mérése.
  • A tej leptin koncentrációjának mérése.
  • A leptin koncentrációjának mérése a kölykök szérumában.
  • A hasított test összetevői (zsír: fehérje arány).
  • Statisztikai analízis.
  • AZ EREDMÉNYEK
  • Anya testtömege.
  • Tejtermelés és leptin koncentráció.
  • Rügy szérum leptin.
  • Testtömeg és tejbevitel.
  • Korrelációs vizsgálatok.
  • 25 napos fiatalok testösszetétele.
  • VITA
  • szójegyzék

absztrakt

Az utódok szuboptimális fejlődési környezetének egész életen át tartó anyagcsere problémái vannak. Megvizsgáltuk az anya alacsony fehérjetartalmú étrendjének terhesség és/vagy szoptatás során a tejmennyiségre és a leptin koncentrációra gyakorolt ​​hatását a szülés utáni 7., 14. és 21. napon. A kontroll anyák 20% kazeint (C) és korlátozott anyák (R) 10% kazeint fogyasztottak. négy csoportot biztosít: CC, RR, CR és RC (terhesség első betűje és második laktáció) az anyai táplálkozás terhesség és szoptatás alatti hatásainak értékelésére. A tej leptin nem volt meghatározó a köldökzsinór szérum leptinben. A kölyök szérumában lévő leptin egyetlen posztnatális korban sem gátolta az étvágyat. A köldökzsinór szérum leptin nem korrelál a zsírszövettel. Végül a köldökzsinór szérumában a posztnatális leptin normális növekedését a prenatális alultápláltság késleltette. Ezek az adatok arra utalnak, hogy a magzati táplálkozás módosítja az újszülött leptin növekedésének időzítését, és hozzájárulhat a megváltozott étvágy és anyagcserezavarok kialakulásához az élet későbbi szakaszaiban.

A fő

Embereken végzett epidiológiai vizsgálatok (1) és kísérleti állatkísérletek (2) kimutatták, hogy az öl és az újszülött korai életének szuboptimális környezete megváltoztatja a növekedést és hajlamosítja az egyéneket egész életen át tartó egészségügyi problémákra. Az anya terhesség és/vagy szoptatás alatti korlátozásának hatásait számos különböző modellben vizsgálták. A különböző növekedési, endokrin és kardiovaszkuláris fenotípusok a táplálkozási korlátozások eredménye a különböző fejlődési ablakokban. A perinatális alultápláltság hajlamosítja az utódok elhízását felnőttkorban a szabályozási mechanizmusok, köztük a leptin által közvetített központi idegpályák kialakulásának változásával (3). A korai növekedési korlátozás utáni gyors felzárkózás növeli az elhízás és a szív- és érrendszeri betegségek kockázatát a későbbi életben (4, 5).

A fejlődés programozásában az egyik legfontosabb újszülött tényező a táplálás megfelelősége a laktáció alatt. A szoptatás csökkenti az elhízás kockázatát a későbbi gyermekkorban (6). Az étvágy jövőbeli ellenőrzését számos tényező befolyásolhatja, beleértve az anyatej összetételét, energiatartalmát és mennyiségét. Az anyatej a leptin hormont (7) tartalmazza, amelyet különféle szövetekben termelnek és szekretálnak, különösen az adipociták (8), amelyek a felnőtt állatok hipotalamusz szintjén szabályozzák a táplálékfelvételt és az energiafelhasználást (8, 9). A keringő leptin szint pozitívan korrelál a zsírraktárakkal (10). A posztnatális élet első napjaiban a leptin szintje magasabb, mint a fejlődés során később megfigyelt szint (11). Számos tanulmány kimutatta a leptin növekedését a posztnatális napok körül (PND) 10-14 között patkányokban (11). Ez a növekedés a későbbi életben az étvágyat szabályozó központi idegrendszeri mechanizmusok érésével függ össze. Úgy tűnik, hogy a leptin kulcsfontosságú szerepet játszik a hipotalamusz orixigén és anorexigén centrumainak strukturális és funkcionális fejlődésének programozásában is a korai posztnatális időszakban.

Kimutattuk, hogy az anyai fehérje korlátozása patkányokban vemhesség vagy laktáció alatt megváltoztatja a szülés utáni növekedést, az ízletes viselkedést és a leptin szintet a szülés utáni 110. napon (12). A fejlesztési programozás kiskutyákra gyakorolt ​​hatása az utódok nemétől és az alultápláltsági expozíció periódusától függ. Teixeira és mtsai. kimutatta a leptinszint változását a laktáció alatt olyan kölyökkutyáknál, akiknek anyja fehérje vagy energia korlátozásnak volt kitéve (13 Adatainkkal (12) ellentétben az elválasztás után a szérum leptin koncentrációja nem változott. Ez az eltérés az alom méretének különbségeivel magyarázható, amelyek a szoptatás alatt fennmaradtak ezekben a vizsgálatokban.

Kevés figyelmet fordítottak arra, hogy a különböző étrendi korlátozási rendszerek hogyan változtatják meg a tej mennyiségét és minőségét a szoptatás alatt. Beszámoltak az utódok súlya, az utódok növekedése és a tej leptin koncentrációja közötti összefüggésekről (14). Azonban idegen fajokban, ahol a korai posztnatális leptinnövekedés döntő szerepet játszik az agyi ízközpontok érésében, fontos meghatározni, hogy az e fő érési funkcióért felelős leptin magzati vagy anyai eredetű-e.

Kiértékeltük az alacsony fehérjetartalmú izokalorikus étrend terhesség és/vagy laktáció idején történő táplálásának hatását a kölykök számára rendelkezésre álló tej és tej leptin koncentrációra a PND 7, 14 és 21 esetében, hogy megállapítsuk, van-e összefüggés az újszülött leptin koncentrációja között összehasonlítva a tej leptin koncentrációival és az összes tej leptinnel, amelyet patkányoknál újszülött életére juttattak a kölykökhöz.

ANYAGOK ÉS METÓDUSOK

Az állatok gondozása és gondozása.

Valamennyi eljárást az Állatkísérletekkel foglalkozó Etikai Bizottság hagyta jóvá "Intituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición, Salvador Zubirán" (INCMNSZ), Mexikó. Részletesen közzétették a négy utódcsoport anyai táplálkozásának, tenyésztésének és kezelésének részleteit (15). Röviden: az anyák szűz nőstény Wistar albínó patkányok voltak, 11 ± 1 hetesek és 240 ± 20 g tömegűek, amelyeket az INCMNSZ kapott. A Purina Laboratory Chow 5001 rendszeres ciklusú nőstény patkányokat kontrollált megvilágítás mellett (7: 00-19: 00 között 22-23 ° C-on világít).

A nőstény patkányokat egy éjszakán át párosították igazolt hím tenyésztőkkel, és azt a napot, amikor a spermiumok jelen voltak a hüvelyi kenetben, fogantatás napjának, 0. napnak neveztük. A vizsgálatban csak azokat a patkányokat tartottuk meg, akik a hím bevezetésétől számított 5 napon belül vemhesek voltak. egyedi metabolikus ketreceket, és véletlenszerűen két csoport egyikére osztva 20% kazeinnel (kontroll étrend-C) vagy 10% kazein izokalorikus étrenddel (korlátozott étrend-R) táplálva (16). Étel és víz ad libitum volt elérhető .

Az ételt lapos keksz formájában tálalták, amelyeket a grill mögött tartottak, amelyeken keresztül a patkányok rágcsálták az ételt. A szülés utáni 20. napon a vemhes patkányokat optimális szállítási körülmények között normál ketrecekbe helyezték, amelyek a nap elején, a fogamzás utáni 22. napon 9 órától délig következtek be. A születés napját a születés utáni 0. napnak tekintettük.

Az anya súlyát, az alom méretét és a kölyök súlyát születéskor rögzítettük. Az igen nemi szervek távolságát meredeken mérték. Közzétett adataink szerint (12) a nemet aszerint értékelték, hogy a nemek közötti távolság kisebb volt (nő) vagy nagyobb, mint (férfi) 2,5 mm. Az alanyok homogenitásának biztosítása érdekében több mint 14 kölyök vagy legfeljebb 12 kölyök almát nem vonták be a vizsgálatba. A 12-14 kölyök almot minden anyánál 12 kölyökhöz igazítottuk, megtartva a lehető legszorosabb nemi arányt: 1: 1. Négy csoportot azonosítottak: CC, amelyben a terhesség alatt kontroll étrendben részesülő anyákat továbbra is kontroll etették diéta szoptatás alatt; RR, amelyben azok az anyák, akik terhesség alatt korlátozott étrendet kaptak, továbbra is korlátozott étrendet kaptak a szoptatás alatt; CR, amelyben azok az anyák, akik terhesség alatt kontroll étrendet kaptak, korlátozott étrendet kaptak laktáció alatt; és RC, amelyben a terhesség alatt korlátozott diétát kapott anyák kontroll étrendet kaptak a szoptatás alatt. Az elválasztás után (PND 21) az összes kölyökkutyát C diétával etették.

1. kísérlet.

Huszonkét anya/alom: CC (n = 5: 5, 6 ± 0, 4 férfi/alom, 6, 4 ± 0, 4 nő/alom), RR (n = 6: 5, 5 ± 0, 5 ps/alom, 6, 5 ± 0, 5 nő/alom), CR (n = 6: 5, 3 ± 0, 7 férfi/alom, 6, 7 ± 0, 7 nő/alom) és RC (n = 5: 6, 2 ± 0, 2 hím/alom, 5, 8 ± 0,2 nő/alom) anyatejtermelésre és anyatej szopásra vizsgálták. Alomonként két hím és két nőstény kölyköt alkalmaztak véletlenszerűen a tetem összetevőinek meghatározására. A kiskutya neme szerinti különbségek előzetes elemzése nem tárt fel különbségeket, ezért minden adatot összegyűjtöttünk.

2. kísérlet.

Nyolcvan anyát és almot, n = 5 a korosztály számára, alkalmaztak az anyatej és a szérum leptin koncentrációjának vizsgálatára kölykökben. Véletlenszerűen két hímet és két nőst/almot alkalmaztak életkoronként a szérum leptin meghatározásához, kivéve a PND 2 utódjait, amelyekben alomonként minden nemet minden kölyköt alkalmaztak (n = 4-8 kölyök/nem), és mintákat kérdeztek meg. . Ebben a korban nem voltak különbségek a szérum leptin szérumban, ezért átlagoltuk a férfiak és a nők adatait.

Az anyatejtermelés és az anyatejbevitel mérése.

7:00, 14 és 21 órakor 7:00 órakor. A kölyköket 4 órán keresztül eltávolították az anyáktól, ezalatt az anyák ad libitum-t ettek, míg a kölyköket nem etették. A kölyökkutyákat állandó jelölővel jelölték a farkán. Az anyákat lemértük a 4 órás periódus elején és végén. A kölyökkutyákat egyenként mérlegelték, mielőtt visszaadták anyjukhoz, majd 1 órával később.

Amint az alábbiakban kifejtésre került, az anya és a kölyök súlygyarapodása közötti kiváló korrelációt alkalmazták a tejtermelés testtömeg-növekedésének közelítésének igazolására. A relatív tejbevitelt a kölyök abszolút táplálékfelvételéből/testtömegéből számítottuk.

A tej leptin koncentrációjának mérése.

A tejet 7, 14 és 21 PND-n nyerték. A kölyökkutyákat 4 órán át gyűjtötték az anyáktól, majd az anyák 0,8 U oxitocint (ip) kaptak, és a tejet 15 perc múlva expresszálták. A mintákat vortexeljük, alikvot részekre osztjuk és -20 ° C-on lefagyasztjuk az elemzésig. A tejmintákat pipettázás előtt 37 ° C-on felolvasztották, és pipettázás előtt alaposan összekeverték a minta egységességének biztosítása érdekében. A tej leptin koncentrációját RIA-val határoztuk meg a Linco Research, Inc. kereskedelmi patkánykészletével. 0,5 ng/ml kimutatási határral, 100 μl mintaméretet használva. A tejmintákat két példányban elemeztük.

A leptin koncentrációjának mérése a kölykök szérumában.

Reggel 7: 00-kor 7, 14 és 21 kölyköt vettek el az anyáktól 4 órán át, ezalatt a kölyköket nem etették meg. Az összes mintát éhomi patkányoktól kaptuk, hogy elkerüljük a leptin variációit. 2 d éves korú leszármazottak nem voltak böjtölők. 11:00 és 12:00 között a kölyköket gyorsan leölték rágcsáló guillotine segítségével (Thomas Scientific, NJ). A hasi vért polietilén csövekbe gyűjtötték, és hagyták 1 órán át 4 ° C-on alvadni. A vérmintákat 1500 g-on 15 percig 4 ° C-on centrifugáltuk. A szérummintákat a vizsgálatig -20 ° C-on tartottuk. A kölyök szérum leptin-koncentrációját RIA-val határoztuk meg, a Linco Research, Inc. kereskedelmi patkánykészletével. Minden szérummintát kétszer teszteltünk.

A hasított test összetevői (zsír: fehérje arány).

25 napos korban a patkányokat gyorsan leöltük a fent leírtak szerint, és analízisig kis műanyag zacskókban fagyasztva tartottuk őket. A fejeket és a gyomor-bél traktust kizárták a kölykökből, és nem vették be az elemzésbe. Mérés után (nedves súly) az egyes hasított test felét apró darabokra vágtuk, kátrányos főzőpohárba helyeztük és 60 ° C-on állandó tömegig szárítottuk. A fogyás a víz súlyának számít. A szárított testeket összetörtük és alikvot részeket vettünk. A zsírt gravimetrikusan határoztuk meg, az oldószert hexán-izopropanol-extraktumból Soxhlet-módszerrel, az összes nitrogént pedig Kjeldahl-módszerrel lepároltuk (17).

Statisztikai analízis.

Az alomállatok adatait átlagoltuk, és az elemzéseket csak az alomszámra végeztük. Az összes adatot átlagként ± az átlag standard hibájaként adjuk meg. A statisztikai elemzést ANOVA alkalmazásával, majd Tukey-teszt alkalmazásával végeztük. A páratlan t tesztet a férfiak és a nők adatainak összehasonlítására is alkalmazták. Az anyatejtermelést, az anyatej-bevitelt, az emlő és a fiatalkori szérum leptint, valamint a kölyök testtömeg-összefüggéseit Pearson-korreláció segítségével számoltuk ki. o

Rügy szérum leptin. Átlag ± SEM, n = 5 liter egyetlen anya. * Maximális leptinérték ugyanabban a csoportban, p 0,05), még akkor is, ha az összes csoportot és a különféle napokat kombináltuk (r = 0,04, p = 0,7). A tejtejből származó leptin és lutein aránya Csehországban minden korcsoportban magasabb volt, mint a CC-ben (p

Anyatejfogyasztás a tejtermelés függvényében (A) PND 7 (r = 0, 14, p = 0, 6), (B) 14 (r = 0, 8, p

A köldökzsinór szérum leptin a tejbevitel függvényében (A) CC (r = 0, 3, p = 0, 3), (B) RR (r = 0, 003, p = 0, 9), (C) CR (r = 0, 1, p = 0, 7), (D) RC (r = 0, 5, p = 0, 07) és (E) minden csoport és nap (r = 0, 3, p = 0, 01). Átlag ± SEM, n = 5 liter.

Teljes méretű kép

Pozitív összefüggés volt az abszolút tejbevitel (g/h) és a kölyök testtömege (g) között a CC, CR és RC csoportokban a PND 7, 14 és 21 esetében (p

A kölykök testsúlya (A) az abszolút tejbevitel függvényében: CC (r = 0, 76, p = 0, 001), RR (r = 0, 28, p = 0, 3), CR (r = 0, 9. o

A test utódainak összetétele (zsír/fehérje arány) PND 25 hím (fekete vonal) és nőstény (fehér vonal) esetében. Átlag ± SEM, n = 5 liter. p PND