absztrakt

A fő

Az összes emlőrákos esetek körülbelül 5% -a örökletes hajlam szindrómákhoz kapcsolódik, és körülbelül felüket a BRCA1 és BRCA2 gének mutációi okozzák (Hopper, 2001). A BRCA1 és BRCA2 gének mutációinak hordozói az emlőrák életében akár 90% -os kockázatot jelentenek (Rebbeck, 2002), és hatékony megelőzési stratégiákra van szükség ezekre a nőkre.

Anyagok és metódusok

elemeket

Asztal teljes méretben

Mellszövet beültetése atmikus meztelen egerekbe

A szteroid receptorok proliferációjának és expressziójának immunhisztokémiai meghatározása

A proliferatív aktivitást immunhisztokémiai módszerrel (IHC) értékeltük ki az egér MIB-1 monoklonális antitest (Coulter Ltd, Egyesült Királyság) alkalmazásával, amelyet a Ki67 proliferációval társult antigén ellen termeltünk. Az ERα és PgR expresszióját IHC-vel határoztuk meg egér monoklonális anti-ERα antitesttel (ID5 klón, Dako Ltd, Egyesült Királyság) és patkány monoklonális anti-PR antitesttel (KD68 klón, Abbott Laboratories, Egyesült Királyság). A mikrohullámú antigén módszereit és hígításait fentebb leírtuk (Clarke és mtsai., 1997a). Az antitestkötést közvetett módon, megfelelő biotinilezett második antitestek, peroxidázzal konjugált avidin-biotin komplex (ABC Elite, Vector Laboratories, Egyesült Királyság) és diaminobenzidin alkalmazásával, kromogénként detektáltuk. Az immunfestés mennyiségi meghatározását fénymikroszkóppal végeztük, és a lololoalveoláris terminális csatornaegységek hámsejtjeire korlátoztuk. A megszámlálandó területeket kis teljesítmény mellett fókuszmentesen választották ki, majd a teljes nagy teljesítményű mezőket rögzítették. Mintánként legalább 1000 hámsejtet értékeltünk, és a jelölt sejtek számát a sejtek teljes számának százalékában fejeztük ki. A festés intenzitását nem értékeltük.

statisztikai módszerek

Az adatokat mediánként mutatjuk be a megfelelő interkvartilis tartományokkal (IQR) együtt. A kezelés vagy a kockázati csoportok közötti általános változásokat Kruskal-Wallis nemparametrikus, egyirányú varianciaanalízissel elemeztük. Ha ez 5% -os szinten szignifikánsnak bizonyult, akkor páronkénti összehasonlításokat végeztünk nemparametrikus Mann-Whitney U-teszt alkalmazásával.

az eredmény

Az ösztradiol minden rizikócsoportban stimulálja az emlő hámsejtjeinek proliferatív aktivitását

Az emlőrák kockázatának kitett nőktől vett normális emlőhám proliferatív aktivitása ( A ) magas kockázatú nőknél ( B ) A BRCA1 vagy BRCA2 mutáció összes hordozója ( C ) és a BRCA1 mutációs hordozók ( D ), amelyeket atmos meztelen egerekbe ültettek be (0. nap) és 1 hetes kontroll kezelés után 0,5 mg E2 vagy 2,0 mg E2 erős pellettel. A félkövér vízszintes vonalak jelzik a medián értékeket, valamint az IQR-t jelölő oszlopok feletti képeket. A zárójelben lévő számok az elemzéshez rendelkezésre álló minták száma az egyes csoportokban, és a P értékek a kezelési csoportok közötti különbségek jelentőségét jelzik a Kruskal-Wallis nemparametrikus varianciaanalízissel. Ctrl = kontroll.

Teljes méretű kép

A progeszteron receptor expressziójának ösztradiol általi indukciója károsodik az emlő szövetében a BRCA mutációs hordozóktól

Nem figyeltünk meg szignifikáns különbséget az emlő hámsejtjeinek ERa és PgR expressziójában a kockázati csoportok között abban az időben, amikor a szövetet nőktől gyűjtötték (2. táblázat). Az implantáció után 14 nappal azonban a kezeletlen egerek a PgR-pozitív sejtek százalékos arányának szignifikáns csökkenését mutatták az összes kockázati csoportban (3. táblázat). Ez a BRCA1 mutációval rendelkező nők szövetmintáiban volt a legnyilvánvalóbb, és ennek eredményeként a PgR-pozitív sejtek százaléka körülbelül négyszer alacsonyabb volt, mint a populáció-kockázati csoportban (P

normális

A progeszteron receptor expressziója a normál emlőhámban az emlődaganatos populációban szenvedő nőktől, a magas kockázatú betegektől, valamint azoktól, akik BRCA1 és BRCA2 mutációkat hordoznak atmikus meztelen egerekbe, és 1 hétig kontrollon kezelték őket, ( A ), 0, 5 E2 ( B ) vagy 2,0 mg E2 ( C ) -szilasztikus pellet. A félkövér vízszintes vonalak jelzik a medián értékeket, valamint az IQR-t jelölő oszlopok feletti képeket. A zárójelben szereplő számok az elemzéshez rendelkezésre álló minták száma az egyes csoportokban, és a P értékek a kockázati csoportok közötti különbségek jelentőségét jelzik a Kruskal-Wallis nemparaméteres varianciaanalízissel. PgR receptor = progeszteron; PR = populációs kockázat; HR = magas kockázat; Minden mutáció = minden mutáció; Csak BRCA1 = csak BRCA1 mutációs hordozók .

Teljes méretű kép

A nagy dózisú E2 pellet hatását a PgR expresszióra az emberi emlő hámjában a kezelés megkezdése után minden időpontban a 3. ábra mutatja. A populáció-kockázat csoport szövetmintáiban a PgR expresszió 1 hét után volt maximális. A kezelés nagy dózisú E2 pellettel és ez a szint a kísérleti időszak hátralévő részében fennmaradt. Ezzel szemben az összes mutáció csoportjában a válasz gyengült, így a PgR-pozitív sejtek százalékos aránya az e csoportból származó mintákban szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a rizikócsoport populációjában, nemcsak a kezelés megkezdése előtt, hanem 2 után is. héttel a kezelés után (P

Az E2 kezelés időbeli hatása a mell hám progeszteron receptor expressziójára az emlőrák populációban szenvedő nőknél (♦) a magas kockázatú nőkhöz (▪), valamint a BRCA1 és BRCA2 mutációval rendelkező személyekhez (▴) képest. A medián értékeket szilárd szimbólumok képviselik, míg a hibasávok az IQR-t jelzik, a zárójelben lévő számok pedig az egyes csoportok elemzésére rendelkezésre álló minták. * P ** P *** P 1 nap-1 csökkentette a Ki67 expressziót ebben a három kockázati csoportban, összehasonlítva a csak 0,5 mg E2-vel (P −1 hét −1) a populációs kockázatban, megnövekedett = kockázatok és az összes mutáció csoportjai összehasonlítva 0,5 mg E2-hez önmagában (4A. ábra, B és C ábra, P

Az emlőrák populációs kockázatának kitett nőktől vett normális emlőhámproliferatív aktivitás ( A ), magas kockázatú emberek B ), BRCA1 és BRCA2 mutációkban szenvedő betegek ( C ) és a BRCA1 mutációs hordozók ( D ) az egerek sportos szabad szemeibe történő beültetés és 0,5 mg E2-vel való kezelés után 1 hétig, majd 2 hét E2-vel TAM-mal vagy fulvestránnal kombinálva. A félkövér vízszintes vonalak a mediánokat, valamint az IQR-t jelölő oszlopok tetején lévő számokat jelzik. A zárójelben szereplő számok az egyes kezelési csoportokban az elemzésre rendelkezésre álló minták száma, és a P értékek a kezelési csoportok közötti különbségek jelentőségét jelzik a Kruskal-Wallis nemparametrikus varianciaanalízissel. Ctrl = kontroll; 0,5 mg E2 = kezelés 0,5 mg E2-szilikát pellettel; TAM = tamoxifen (1 mg egér-1 nap-1); FUL = fulvestrant (5 mg egér −1 hét −1).

Teljes méretű kép

Megvizsgálták a TAM és a fulvestrant azon képességét is, hogy visszafordítsa a nagy dózisú (2 mg) E2 kezelés hatását az emlő hámsejtjeinek Ki67 expressziójára (az adatokat nem mutatják be). Mindkét antiösztrogén minden rizikócsoportban csökkentheti az E2 proliferációra gyakorolt ​​hatását, de hatásuk meglehetősen változó volt, mivel a fenti adagolási renddel elért szérum gyógyszerszint nem volt elegendő ahhoz, hogy leküzdje a magas plazma E 2 szintet 2 mg E2 pellet.

vita

Összefoglalva, kimutattuk, hogy a BRCA1 és BRCA2 génekben heterozigóta mutációkat hordozó nőktől gyűjtött E2-stimulált emlőhámproliferációt mind a SERM (TAM), mind az antiösztrogén (fulvestrant) megfordíthatja, amelyeknek nincs agonista hatása. hogy a megváltozott PgR expresszió a BRCA1 és BRCA2 gének mutációival társított fenotípus. Arra a következtetésre jutunk, hogy a korai antiösztrogén-kezelésnek hatékonynak kell lennie az emlőrák megelőzésében a magas kockázatú nőknél.

köszönöm

Ezt a tanulmányt a Christie Kórház Kutatási Alapja és az AstraZeneca Pharmaceuticals finanszírozta. Köszönöm Dr. Alan Wakell (Astrazeneca) az ebben a vizsgálatban használt fulvesztrant biztosításáért és Dr. John Coyne (South Manchester University Hospital Hospital) a felhasznált minták szövettani vizsgálatában nyújtott segítségéért.