genetikai

  • absztrakt
  • a cél:
  • Dizájnt tanulni:
  • az eredmény:
  • következtetés:
  • bevezetés
  • mód
  • statisztikai módszerek
  • az eredmény
  • vita

absztrakt

Az öröklött protrombotikus mutációk prevalenciájának és a köldökzsinór artériás vagy vénás katéter (UAC vagy UVC) összefüggő trombózisának előfordulására és súlyosságára gyakorolt ​​hatásának értékelése.

Dizájnt tanulni:

Valamennyi UAC-val vagy UVC-vel rendelkező újszülöttet prospektív módon vizsgálták a trombózis jelenléte, súlyossága és időzítése szempontjából duplex Doppler ultrahang szkenneléssel. Genetikai vizsgálatokat végeztek az V. faktor Leiden (FVL), protrombin (PTm) és metilén-tetrahidrofolát-reduktáz (MTHFR) mutációkra restrikciós fragmens hosszúságú PCR és polimorfizmus vizsgálatokkal.

az eredmény:

A köldökzsinór katéterrel (UC) kapcsolatos trombózis 16/53 (31%) újszülöttnél alakult ki; Az UAC 23% -a és az UVC 22% -a társult trombózissal. A szignifikáns protrombotikus mutáció prevalenciája 10/51 (20%) gyermeknél volt jelen: FVL (8%), MTHFR667 homozigozitás (10%), MTHFR1298 homozigozitás (2%) és PTm (0%). Az ilyen protrombotikus mutációkat hordozó betegek nem növelték az UC-vel összefüggő thrombus kockázatát; Vizsgálatunk képes volt a szignifikáns mutációk 2,5-szeresére emelkedett trombózis kimutatására. Ezenkívül az MTHFR667 heterozigozitást a csecsemők 41% -ában, az MTHFR1298 heterozigozitást pedig 52% -ban találták, és ez szintén nem társult az UC-hez kapcsolódó thrombus fokozott kockázatával. Az MTHFR kettős heterozigozitás (db het) kockázata 14%, a szignifikáns vagy db het kockázata 17/51 (33%), és bármilyen mutáció kockázata 90% volt.

következtetés:

A protrombotikus genetikai mutációk gyakoriak az újszülött intenzív osztályon élő populációnkban, de úgy tűnik, hogy nem növelik az UC-vel összefüggő trombózis kockázatát.

Az újszülöttkori köldökartériás katéter (UAC) és a köldökvénás katéter (UVC) használata sok újszülött intenzív osztályon (NICU) rutinszerű gyakorlat. Az UAC használatát az összes befogadott NICU 10–64% -ában jelentették. 1 A trombózis, mint az UAC szövődménye, gyakori előfordulási gyakorisága 4,5 és 90% között van. 2, 3, 4, 5 Az aorta trombózis szövődményei közé tartozik a bél ischaemia, a magas vérnyomás, a csökkent vese perfúzió, a teljes aorta elzáródás és a pangásos szívelégtelenség. 6, 7, 8, 9 Az UVC-t bonyolító trombózis alkalmazása szintén gyakori, a jelentett incidencia 4,1-44%. 4, 10, 11

Az ultrahangvizsgálatot sikeresen alkalmazták a nagy erek trombusának azonosítására. 5., 26. Ez egy biztonságos, könnyen hozzáférhető teszt, amelyet az ágy mellett lehet elvégezni. Mivel a köldökzsinór katéterek (UC) viszonylag magas gyakorisággal társulnak trombózisokkal, feltételeztük, hogy ha ezen genetikai protrombotikus mutációk (FVL, PTm és/vagy MTHFR) közül egy vagy több megnöveli az UC-vel összefüggő trombózis kockázatát. Tudomásunk szerint ez a tanulmány az első, amely a protrombotikus mutációk prevalenciáját vizsgálja az UC-t igénylő NICU-populációban és azok kapcsolatát az UC-vel összefüggő trombózisokkal.

mód

Ez a tanulmány egy prospektív vizsgálat volt, amelyet a Nafi Növényszervezetnél, a buffalói Női és Gyermekkórházban hajtottak végre 2002. június és 2003. február között. A tanulmányt a Kórház Intézményi Felülvizsgálati Testülete hagyta jóvá. Az összes regisztrált gyermek szüleitől írásos beleegyező nyilatkozatot kaptak. Minden gyermek, aki gondozása részeként sikeres UC-reklámozáson esett át, részt vehetett a vizsgálatban. Az UC lokalizálásáról vagy eltávolításáról a klinikai csoport a klinikai indikációk alapján döntött. Az Argyl Neosert 3, 5 vagy 5 F poliuretán katétereket (Tyco Health Care Group Mansfield, MA, USA) használtuk a köldökér katéterére. Az UAC összes végpontját röntgensugárral igazoltuk, és T6 és T9 között helyezkedtek el. Az UVC-csúcsokat közvetlenül a membrán fölé helyeztük. Valamennyi UAC-ban folyamatos 1 egység/ml heparin infúzió volt fél sóoldatban, 1 ml/h sebességgel; az összes UVC-oldat 0,5 egység/ml heparint tartalmazott, és ezeket rutinfolyadékok és parenterális táplálás biztosítására használták fel.

Minden klinikai és laboratóriumi adatot prospektív módon gyűjtöttünk. A klinikai paraméterek közé tartoztak a szülészeti tényezők, a chorioamnionitis jelenléte, a prenatális szteroidok használata, a szülés típusa, terhességi kor, születési súly, Apgar-pontszám, köldökzsinór vérgáz, a légzéstámogatás típusa és időtartama, felületaktív anyagok használata, szepszis epizódok, nekrotizáló epizódok koponyaűri vérzés, vérnyomásmérés, vizeletmennyiség és a NICU-ban való tartózkodás teljes hossza. A beleegyezés időpontjában a családot kifejezetten felkérték a mélyvénás trombózis, a tüdőembólia, a kisgyermekes sztrók és az örökletes thrombophilia esetleges kórtörténetére. A múltban nem voltak ilyen problémákkal küzdő családok. A laboratóriumi adatok magukban foglalták a vérképeket, a vér karbamid-nitrogént, a szérum kreatinint, a vizelet vizeletének eredményeit, a vérkultúrákat, a koagulációs vizsgálatokat, valamint a röntgen és ultrahang eredményeket.

A DNS-extrakciót egy kereskedelemben kapható extrakciós készlet alkalmazásával hajtottuk végre (Gentra Systems Inc., Minneapolis, MN, USA). Az egyes helyeket polimeráz láncreakcióval (PCR) amplifikáltuk, és genotipizálást végeztünk restrikciós fragmens hosszúságú polimorfizmus technikával. A minőségellenőrzés három kontrollmintából állt: ismert homozigóta vad típus, heterozigóta, homozigóta mutáns; ezeket a mintákat minden PCR-ciklusba bevontuk. Az FVL genotípusát a V-faktor gén 287 bázispáros régiójának amplifikálásával azonosítottuk, majd ezt követően az MnlI restrikciós endonukleázzal emésztettük. Az MTHFR amplifikáció 232 bázispárból állt, és Hinf I-gyel emésztettük. A protrombin genotípusát 345 bázispárnyi Hind III emésztéssel határoztuk meg. Az összes lehasított terméket 10% poliakrilamidon gélelektroforézissel választottuk el. A résztvevő DNS-minták minden ciklusa három szekvenciális kontroll DNS-mintát és egy negatív kontrollt tartalmazott. A heterogén és homozigóta mutáns V, a protrombin 20210G> A és az MTHFR összes mintáját újra izoláltuk és újra elemeztük a genotípus megerősítése érdekében. Valamennyi mintát a thrombophilia kézikönyvünknek megfelelően elemeztük.

statisztikai módszerek

A minta méretének kiszámítása azon a feltételezésen alapult, hogy a betegek 22% -a pozitív FVL, PTm vagy homozigóta MTHFR677-re, amelyek jelentős mutációk (homozigóta MTHFR1298 később került hozzáadásra), és hogy a csecsemők 35% -ában UC-vel társult trombus fordul elő. Α 0,05 és 80% -os hatékonyság mellett 41 beteget kellett felvennünk (kilenc eset (szignifikáns mutáció van jelen) és 32 kontroll), hogy kimutassuk az UC-alvadás kockázatának háromszoros növekedését bármilyen jelentős protrombotikus génnel rendelkező csecsemőknél. mutációk. A statisztikai elemzéshez a STATA-t (State College, TX, USA) használtuk. Valamivel több beteget (IRB jóváhagyással) vontak be a vizsgálatba, hogy kompenzálják a vérminták DNS-vizsgálataival kapcsolatos problémákat, mivel a vérmintákat a vizsgálat végéig adagolták. A folyamatos adatok összehasonlításához Student t-tesztjét használtuk. A kategorikus adatok összehasonlításához a χ 2 tesztet és Fisher pontos kétfarkú valószínűségi tesztjét használtuk.

az eredmény

2002 júniusától 2003 februárjáig 159 UAC-t vagy UVC-t vagy mindkettőt tartalmazó újszülöttet helyezték el, és 70-től (megfelelő minta alapján) kértek beleegyezést. Összesen 53 beteget vontak be (76% -os egyeztetési arány); A terhességek 66% -a kevesebb volt, mint 32 hét. Az 53 alany közül 25-nek csak UAC-ja volt, hatnak csak UVC-je, 22-nek UAC-ja és UVC-je volt, összesen 47 UAC és 28 UVC. Összesen 120 Doppler ultrahang vizsgálatot végeztek 53 betegnél. Összesen 16-nak (31,3%) volt trombusa (akár UAC-hoz, akár UVC-hez kapcsolódva) (1. táblázat). A populáció jellemzői, például a terhességi kor, a születési súly, a prenatális szteroidok használata, az Apgar-pontszám, a pH-zsinór, a magas vérnyomás, az oliguria, a nekrotizáló enterocolitis (NEC), az élelmiszer-intolerancia, a szepszis és a trombocitopénia, nem állnak összefüggésben a trombózis jelenlétével. Az UAC-val összefüggő trombózis prevalenciája 6/24 (25%) volt UAC-ban szenvedő és UVC nélküli gyermekeknél, szemben az UAC-val és UVC-vel rendelkező gyermekek 5/23 (22%) értékével. Az UVC-hez kapcsolódó trombózis prevalenciája 1/6 (17%) volt UVC-s és UAC nélküli gyermekeknél, míg UVC-vel és UAC-val rendelkező gyermekeknél 5/22 (23%).

Asztal teljes méretben

A 47 UAC-ban szenvedő gyermek közül 11-nél artériás thrombus volt (23,4%). A 11 UAC trombózisban szenvedő beteg közül három nagy vérrög volt, öt közepes és három kicsi; egyik sem érintette a vese artériákat. A trombózisban szenvedő betegek egyike sem igényelt trombolízist. Ebből a 11, aorta thrombusban szenvedő gyermekből nem volt magas vérnyomás, kettőnél hematuria volt, és egyiküknek sem volt akut érrendszeri kompromisszum jele vagy tünete. Öt UAC-s gyermek volt magas vérnyomásban, de egyiknek sem volt trombusza. A 28 UVC-s gyermek közül hatnak vénás trombusa volt (21,4%). A hat, UVC-hez társult trombózisban szenvedő beteg közül négynek volt trombusa az IVC-ben, kettőnek pedig trombusa a portális vénában. Mindezen betegeknél artériás vagy vénás trombus nem volt kimutatható a katéter eltávolításáig. Egyik beteg sem szorult kezelésre, és mindegyikük tünetmentes volt. Nem figyeltünk meg szignifikáns összefüggést a vizsgált klinikai vagy laboratóriumi paraméterek és a trombózis kockázata között (1. táblázat); a jelenlegi vérrögben szenvedő gyermekeknél az oliguria előfordulásának növekedési tendenciáját regisztrálták (P-érték = 0,06, Fisher pontos kétoldalas teszt).

A genetikai vizsgálatokhoz mintákat vettek mind az 53 gyermektől; a DNS kivonása azonban két betegnél kudarcot vallott (még a trombus sem). A trombózis előfordulásának és kockázati tényezőinek elemzéséhez mind az 53 beteget felvettük, de 51, teljes genetikai eredménnyel rendelkező beteget elemeztünk a trombózis és a protrombotikus mutációk kapcsolatának elemzésére (1. ábra).

A restrikciós enzimet emésztjük az V. mutáns faktor azonosítására. A gél bal és jobb oldalán lévő sávok 50 bp-tal növekvő DNS-markerek. A 2-4 sáv kontrollminta: (2) normális, (3) homozigóta mutáns és (4) heterozigóta. A másik öt út öt eredményt jelent a beteg számára: három normál vad típusú (wt) és két heterozigóta (ht) az V faktor 1691 G → A.

Teljes méretű kép

A genetikai tesztek eredményeit és a trombózissal való összefüggést a 2. táblázat mutatja. A protrombotikus mutációk prevalenciája a heterozigóta vagy a homozigóta állapotban gyakori volt, és a populáció 90% -ában volt megtalálható. FVL-t a lakosság 8% -ában találtak. Egyik gyermek sem tesztelte pozitívnak a protrombin 20210G> A-t. Öt beteg volt homozigóta az MTHFR667 szempontjából (a populáció 10% -a). Egy beteg homozigóta volt az MTHFR1298-ra (2%). A heterozigóta MTHFR667 és MTHFR1298 gyakoriak voltak, a populáció 41 és 53% -ában találtak. A trombózis kockázatának statisztikailag szignifikáns növekedése nem volt azoknál a betegeknél, akik a tesztelt mutációk egyikét sem hordozták (2. táblázat). Ugyanezre a következtetésre jutottunk, amikor külön elemeztük az UAC és az UVC trombózisokat (3. táblázat), és amikor csak FVL mutációval és homozigóta MTHFR mutációval rendelkező gyermekeket vettünk figyelembe, azaz "szignifikáns mutációkat" és az MTHFR kettős heterozigozitását (2. táblázat).

Asztal teljes méretben

Asztal teljes méretben

vita

Vizsgálati populációnkban az FVL prevalenciája 8% volt, összehasonlítva a közzétett jelentésekkel. 18, 19 Vizsgálatunkban az MTHFR667 mutáció prevalenciája 41% heterozigóta és 10% homozigóta volt, ami szintén összehasonlítható a korábban publikált vizsgálatokkal. 20 Vizsgálatunkban az MTHFR1298 mutáció prevalenciája összehasonlítható volt az Egyesült Államok populációjában jelentett széles skálával. Korábbi tanulmányok szerint az újszülötteknél és a trombózisos gyermekeknél az FVL és az MTHFR mutációk gyakoribb előfordulása a 16, 34 általános populációhoz képest, és a katéterrel kapcsolatos trombózis fokozott kockázatát is kimutatták FVL-ben szenvedő betegeknél; 12, 13, azonban nem találtunk különbséget az MTHFR mutációk és az FVL mutációk prevalenciájában trombózissal és anélkül.

Összefoglalva, az UAC-hoz és az UVC-hez társuló trombózis gyakori volt (23 és 21%), és lényegében tünetmentes és klinikailag váratlan volt. Nevezetesen ebben a vizsgálatban minden trombózist a katéter eltávolítása után azonosítottak. A protrombotikus genetikai mutációk előfordulása NICU populációnkban gyakori, de úgy tűnik, hogy ez nem növeli az UC-hez kapcsolódó trombózis kockázatát.