absztrakt
A multivitamin oldatok fotooxidációja peroxidok képződését eredményezi. Mivel a peroxidok máj steatosishoz és fibrózishoz, valamint kolesztázishoz társulnak, megkérdeztük, hogy a multivitaminok részt vesznek-e a parenterális táplálkozás máj szövődményeiben. A tengerimalac kölyköket úgy osztályozták, hogy intravénásan vagy teljes parenterális táplálást kaptak, vagy fotovédettek, vagy kontrolloldatot (5% dextróz + 0,45% NaCl) kiegészítve a) multivitaminnal; b) fénytől védett multivitaminok; c) riboflavin nélküli multivitaminok; vagy d) peroxidok (H 2 O 2, terc-butil-hidroperoxid). 4 nap múlva májmintát vettek szövettani vizsgálatra és az izoprostán-F2a szintre, amely a radikális támadás markere. A multivitaminok, valamint az általános parenterális táplálkozás összefüggésbe hozhatók a steatosisral (0–4. Pont), amelynek súlyossága csökkent (p + és Cu + Fenton/Haber-Weiss reakciók útján.) várhatóan védelmet nyújtanak a TPN oldatokban képződött peroxidokból származó szabad gyökökkel szemben (12).
A tanulmány célja a multivitaminok szerepének értékelése volt a TPN-hez kapcsolódó máj szövődményekben, amelyet a szövettan dokumentál, és elkülönítjük a fény hatását a peroxidok és/vagy szabad gyökök hatásaitól.
mód
Állati modell.
Ketamin/xilazin alatt a 3-d öreg tengerimalacokat (Charles River, Montreal, Quebec, Kanada) 0,4 mm-es poliuretán katéterrel (Luther Medical Products, Tustin, CA, USA) szereltük fel a külső jugularis vénában és exteriorizáltuk a lapocka régió. A katétert egy áramlási rendszerhez csatlakoztatták, lehetővé téve az állatok mozgását, amelyeket külön-külön műanyag dobozokba tettek, dróthálós aljjal. Az állatokat meleg, kontrollált környezetben tartottuk, 12 órás világos/sötét ciklussal, és kizárólag intravénásan tápláltuk 240 ml/kg/nap adaggal. 4 nap múlva az állatokat feláldoztuk, és a májat szövettani vizsgálati formában tárolt vagy őrölt mintákkal aliquotizáltuk, és a trigliceridek és izoprostánok elemzéséig -80 ° C-on tároltuk, ami a radikális támadás indexe (17). A vizsgálatot az Állatok Intézményi Bizottságának útmutatásai szerint végezték.
Ezt az állatmodellt a máj steatosis korábbi, publikálatlan megfigyelése miatt választották tengerimalac kölyköknél. Ugyanezeket a kísérleti körülményeket kellett megismételni annak igazolására, hogy ez a steatosis fényvédelemmel megelőzhető.
Protokollok.
A multivitaminok és a fény hatásának elkülönítése érdekében az állatokat az alábbi kezelési módok egyikével infundáltuk, amely a multivitamin oldatot olyan koncentrációban tartalmazta, amely hasonló az újszülöttek parenterális táplálásához. A fényvédelmet sötét oldatok előállításával és az infúziós készlet átlátszatlan anyaggal történő lefedésével, valamint a Baxter Canada szívesen biztosított fényvédett intravénás csövének (13) felhasználásával értük el.
MVP + fény: 1% (v/v) MVP (Sabex, Boucherville, Quebec, Kanada), környezeti fénytől nem védve, kontrolloldattal hígítva (50 g/l szőlőcukor + 4,5 g/l NaCl + 1 heparin egység/ml); 5 ml MVP tartalmaz: A-vitamint, 2300 NE; D-vitamin, 400 NE; a-tokoferol, 7 NE; K-vitamin, 200 μg; aszkorbát, 80 mg; tiamin, 1,2 mg; riboflavin, 1,4 mg; piridoxin, 1,0 mg; 5 mg pantotenát; folát, 0, 14 mg; cianokobalamin, 1 μg; nikotinamid, 17 μg; biotin, 20 μg; emulgeálószerként pedig mannit és poliszorbát adalékanyagok.
MVP - fény: 1% (v/v) MVP fényvédett, kontrolloldattal hígítva.
TPN + fény: Két, a környezeti fénytől nem védett oldatot "disznóalapú" elrendezésben infúzióval infundáltunk az infúzió helye közelében: a) kontroll + 9,6 g/kg/d aminosavak (Travasol, Baxter Canada, Mississauga, Ontario), Kanada + 2% MVP 120 ml/kg/nap dózisban; b) kontroll + 9,6 g/kg/d aminosav + 7,6 g/kg/d lipidek (Intralipid 20%, Pharmacia, Peapack, NJ, USA) 120 ml/kg/nap dózisban; 1% MVP + 4,8 g/kg/d aminosav + 3,8 g/kg/d lipidek végső koncentrációjára (240 ml/kg/nap dózisban). A TPN-rendszer összetételét a felnőtt tengerimalacokkal végzett vizsgálatokra vonatkozó ajánlásokból származtatták (18).
TPN fény (-): Ugyanaz a TPN védett a környezeti fénytől.
Annak értékelésére, hogy az MVP és a TPN esetében megfigyelt hatások kapcsolódnak-e peroxidokhoz és/vagy szabad gyökökhöz, az állatok egy másik csoportjának a következő megoldások egyikét adják:
C (kontroll): 50 g/l szőlőcukor + 4,5 g/l NaCl + 1 heparin egység/ml.
H 2 O 2: kontroll + 200 vagy 500 μM H 2 O 2 (Aldrich Chemical, Milwaukee, WI, USA) (208 ± 15 és 500 ± 20 μM).
TBH: kontroll + 50 μM TBH (Aldrich Chemical) (47 ± 1).
A riboflavin szerepének elkülönítése és annak meghatározása érdekében, hogy a multivitaminok specifikusak-e az MVP-re, más állatcsoportokat a következő kezelési módok egyikével infundáltak:
C: ugyanaz, mint fent
MVP + fény: az 1. protokollban leírtak szerint.
MVP + fény riboflavin nélkül: 1% MVP, amelyet Sabex készített riboflavin nélkül, környezeti fénytől nem védve és kontrolloldattal hígítva.
MVI + fény: 1% (v/v) MVI (Aventis, Strasbourg, Franciaország), környezeti fénytől nem védve és kontrolloldatban hígítva; 5 ml porból elkészített oldat a következőket tartalmazza: A-vitamin, 2300 NE; D-vitamin, 400 NE; a-tokoferol, 7 NE; K-vitamin, 200 μg; aszkorbát, 80 mg; tiamin, 1,2 mg; riboflavin, 1,4 mg; piridoxin, 1,0 mg; 5 mg pantotenát; folát, 0, 14 mg; cianokobalamin, 1 μg; nikotinamid, 17 mg; biotin, 20 μg; emulgeálószerként BHA, BHT és mannit adalékok, valamint poliszorbátok.
CVI + fény: 1% (v/v) Cernevit (Baxter Canada), környezeti fénytől nem védve és kontrolloldattal hígítva; 5 ml oldat 3500 NE A-vitamint tartalmaz; D-vitamin, 220 NE; a-tokoferol, 11, 2 NE; aszkorbát, 125 mg; tiamin, 3,51 mg; riboflavin, 4, 14 mg; piridoxin, 4,53 mg; pantotenát, 17, 25 mg; folát, 414 μg; cianokobalamin, 6 μg; nikotinamid, 46 mg; biotin, 69 μg; és glikokol, glikokolsav és szójabab lecitin adalékok.
Szövettan.
A hematoxilin-eozin festés után hepatológiai szövettani vizsgálatot végeztek, és a steatosis súlyosságát 0–4 (1. ábra) értékelték az intravénás adagolási rendet nem ismerő patológusok (PB) és hepatológusok (FA). A pontszám a következőket jelölte: 0 = normális májszerkezet; 1 = látható zsírvakuolok jelenléte az egyes izolált hepatocitákban; 2 = heterogén lebenyeloszlás fokális zsírváltozásai; 3 = diffúz zsírváltozások zsírmentes ritka zónákkal; 4 = diszpergált zsírváltozások, "zsírmentes" zónák nélkül.
A máj szövettana (x 250) szemlélteti a steatosis súlyossági mutatóit 0 és 4 között.
Teljes méretű kép
Analitikai eljárások.
A peroxidokat xilenol-narancs technikával (19) mértük a fent leírtak szerint. Ezt a kémiai vizsgálatot, amely a H 2 O 2 -ot, valamint a szerves peroxidokat (19, 20) méri, a TPN-oldatokra enzimatikus teszt alkalmazásával hitelesítik (21). A három minta átlagos peroxidszintje MVI = 295 ± 8 μM volt; CVI = 358 ± 28 μM; MVP = 198 ± 14 μM; MVP fotóval védett = 131 ± 10 μM; és riboflavin nélküli MVP = 129 ± 3 μM. Az izoprostán F2a-t kereskedelmi enzim immunvizsgálati készlettel (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA) mértük. A máj triglicerid szintjét enzimatikusan mértük kereskedelmi készletekkel (Roche Diagnostics, Laval, Quebec, Kanada).
Statisztikai analízis.
Az összes eredményt átlag ± SEM értékként jelentjük. A steatosis eredményeit Mann-Whitney teszttel elemeztük nem paraméteres adatokra. Az állatok antropometriai jellemzőit (1. táblázat) és a máj F2a izoprostánt transzformáció után ANOVA-val hasonlítottuk össze (természetes logaritmus), hogy biztosítsuk a Bartlett khi-négyzetével meghatározott homoszkedaszticitást. A szignifikancia szintjét p
A parenterális multivitaminok (MVP), a TPN (5% szőlőcukor + 0,45% NaCl + aminosavak + lipidek + MVP) és a fénysugárzás (± fény) hatása a máj steatosisának súlyosságára (0-4 pont és B) ) máj izoprostán F2α. A multivitaminok és a TPN a steatosishoz társultak, amelynek súlyosságát fényvédelem (- fény) csökkentette. A fotóvédelem jelentősen csökkentette az izoprostán szintjét, amely nem felelt meg a steatosis súlyosságának, mivel a TPN lényegesen magasabb szintet indukált a szabadgyökök támadásának eikozanoid markerében. Minden oszlop az átlag ± SEM (minták száma) értékét mutatja. * p 2 (3. ábra). 2 B).
A H 2 O 2 és a TBH infúzió hatása a steatosis (A) súlyosságára és (B) a máj izoprostán F2α-ra. A multivitaminokban termelt koncentrációk tartományában infundált H 2 O 2 és TBH nem váltotta ki a máj steatosis pontszámát, mint a kontrollok (C = 5% dextróz + 0,45% NaCl). A H 2 O 2 oxidatív terhelést váltott ki, mert pozitív hatással volt az izoprostán F2a szintre. Minden oszlop az átlag ± SEM (minták száma) értékét mutatja. * o
A kontrollhoz (C = 5% dextróz + 0,45% NaCl) képest a fotoexponált (+ könnyű) multivitamin készítmények (MVP, MVI, CVI) fokozták a máj steatosisát (0–4 pont). A riboflavin szerepét a fény hatásának hatásában e fényérzékeny vitamin nélküli készítmény (MVP riboflavin nélkül) alkalmazásával teszteltük. Minden oszlop az átlag ± SEM (minták száma) értékét mutatja. * p C: