elemeket
absztrakt
Köztudott, hogy az immunogén vagy myeloablatív vagy mieloszuppresszív kondicionálás után alkalmazott, megfelelő hisztokompatibilis rokon vagy rokon donorokból származó allogén csontvelő-transzplantációk vagy PBSC-k terápiás megközelítést nyújthatnak az ALL és AML magas kockázatú formáinak kezelésében, és potenciálisan gyógyító. e betegségek magas kockázatú formái az első remisszióban. Ezen transzplantációk hatékonyságának fő korlátja azonban a GVHD, a donor transzplantátum T-sejt immunválasza az alloantigének ellen, amelyet lényegében a gazdaszervezet limfo-hematopoietikus rendszerének sejtjei mutatnak be. 3, 4 A 2-4 súlyosságú akut GVHD, amely immunszuppresszív terápiát igényel, a HLA-val rokon betegek 40% -ánál és a HLA-val nem rokon csontvelővel átültetett betegek több mint 50% -ánál figyelhető meg, függetlenül a beadott immunszuppresszív gyógyszerek kombinációitól. transzplantáció után, hogy elkerüljék ezt a szövődményt. Ezenkívül a túlélők további 50% -a folytatja a krónikus GVHD kialakulását. 7
T-sejt-kimerítési technikák a GVHD megelőzésére
A T-sejtek szerepét a GVHD patogenezisében először H2-inkompatibilis egérmodellekben derítették fel. A T-sejtek kimerülésének a GVHD megelőzésében rejlő lehetőségeinek kezdeti közvetlen bemutatását letilálisan besugárzott egerek H2-inkompatibilis T-sejt-kimerített csontvelő- és lépsejtekkel átültetett egereinek tanulmányai szolgáltatták, vagy nem fejlődtek ki az újszülött thymectomia után 8, vagy antitesttel vagy populációkból származó lektin-depletáló T-sejtek. Az ilyen transzplantációk beültethetik és helyreállíthatják a vérképzést és az immunitást anélkül, hogy akut GVHD-t indukálnának.
Ennek a megközelítésnek a bevezetése óta számos különféle módszert értékeltek a T-sejtek kimerítéséről, beleértve a T-sejt-specifikus antigének ellen irányított számos különböző egér monoklonális antitest alkalmazását. Ezeknek a technikáknak a többsége a T-sejtek kimerülését 1,5-2 log-rel csökkenti, és a transzplantáció utáni profilaxist követően a GVHD teljes megelőzését igényli. A Campath CD52-specifikus monoklonális antitest 2,5-3 Log T-sejt-kimerülést ér el, és vagy in vivo, vagy in vitro használták T-sejt-deplécióhoz. Ez a megközelítés jelentősen csökkentette a GVHD-t páros donor-recipiens párosításban, de változó sikert ért el a GVHD megelőzésében a HLA-ban különböző recipiensekben. 16 Ezzel szemben a szója lektin, egy E-rozetta-kimerítési technika, amely következetesen legalább 3 log-kal csökkenti a T-sejteket 10, és az újabban kifejlesztett technikák a CD-4 + progenitor sejtek pozitív szelekcióját alkalmazzák G-CSF mobilizált perifériás vér leukocitákból, amelyek elérik a 4-et. –4. A Log 10 T-sejt kimerülést HLA-val egyező vagy félrevezetett recipienseknek adták be transzplantáció utáni profilaxis nélkül, és hatékonyan csökkenti a súlyos akut és krónikus GVHD előfordulását. 17, 18, 19
Asztal teljes méretben
A T-sejt kimerült transzplantáció az adoptív immunterápiák platformjaként
Az allogén hematopoietikus sejttranszplantációkból származó T-sejt-kimerítési technikák kifejlesztése, amelyek kiküszöbölik a transzplantáció utáni immunszuppresszió szükségességét a GVHD megelőzése érdekében, szintén egyedülálló platformot biztosított az adoptív T-sejt-terápiák vizsgálatához. Immunszuppresszív gyógyszerek hiányában az átvitt T-sejtek exogén gátlás nélkül szaporodhatnak és működhetnek. A korai transzplantált betegek szintén kifejezetten limfopéniásak, lehetővé téve az adoptív módon átvitt T-sejtek homeosztatikus proliferációját a normális limfocita populációban szenvedő betegeknél magasabb szintre.
Transzplantációs programunk jelenleg két indikációra vonatkozóan értékeli az átültető donor eredetű effektor T-sejtekkel történő adoptív immunterápiát: (1) hematológiai rosszindulatú daganatok relapszusainak kezelése vagy megelőzése; és (2) gyógyszerrezisztens vírusfertőzések kezelése.
A transzplantáció utáni kiújulás kezelésében és megelőzésében in vitro vizsgálatokat végezünk a WT-1 fehérje peptid epitópokra specifikus kiterjesztett T-sejtes és donor-specifikus T-sejtek értékelésére olyan betegeknél, akiknek WT-1 + hematológiai rosszindulatú daganatai vannak, konkrétan AML előrehaladott formák az MDS és a myeloma. Ezen felül tanulmányokat indítottunk transzdukált transz-adományozott transzplantációs donorokkal transzdukált EB-specifikus T-sejtekről, amelyek expresszálják a CD19-specifikus kiméra antigénreceptort a CD19 + B-sejtvonal ALL és a non-Hodgkin-limfóma relapszusainak kezelésére. Mivel saját és más központjaink már számos jelentést tettek közzé a CD19-specifikus CAR expresszálására transzdukált T-sejtek klinikai aktivitásáról, a WT-1-specifikus T-sejtekre vonatkozó vizsgálatainkra összpontosítok.
Az elmúlt 3 évben több mint 100 normális transzplantációs donortól keletkezett WT-1-specifikus T-sejteket elemeztünk in vitro szenzibilizációval, autológ monocita eredetű dendritikus sejtekkel, amelyek átfedésben lévő 15-meres peptidekből álltak, amelyek átívelik a WT-1-et. fehérje szekvencia. A mai napig 41 korábban be nem jelentett immunogén epitópot és azok bemutató HLA osztályú alléljait azonosítottuk, és bebizonyítottuk, hogy ezek a HLA I vagy II korlátozott epitópokra specifikus T-sejtek szelektíven lizálják a WT-1 + leukémiás sejteket, amelyek ugyanattól az egyéntől származnak. 47
Tanulmányaink I. és II. A vírusos betegségek adoptív immunterápiájának fázisai HCT-betegeknél a vírusspecifikus T-sejtek terápiás potenciáljára összpontosítottak (1) patológiásan dokumentált EBV + limfómában szenvedő betegeknél, különösen azoknál a betegeknél, akik nem reagáltak a Rituxanra, és (2) nyílt CMV-ben szenvedő betegeknél. betegség vagy tartós virémia, legalább két hétig tartó hagyományos antivirális kezeléssel szemben rezisztens. A kezdeti vizsgálataink során használt T-sejteket a vérképző sejtek transzplantációját végző betegek mindegyikének donorától származtuk. Az egyes donorok PBMC-jéből izolált T-sejteket in vitro tenyésztettük 28-35 napig, szenzibilizálást követően bármely besugárzott autológ donor B-sejttel, amelyet EBV-specifikus T-sejtek esetében transzformáltunk EBV B95.8 törzzsel, 53 vagy autológ dendritikus sejtekkel töltöttünk. átfedő 15-mer peptidkészlettel, amely a CMVpp65 szekvenciát átíveli a CMV-specifikus T-sejtek számára. Az in vitro tenyésztés ebben az időszakban nemcsak az immunodomináns vírusspecifikus T-sejteket választja ki, hanem az alloaktív T-sejtek delécióit is, amelyek potenciálisan képesek GVHD indukálására.
Ezen tanulmányok eredményei bizonyítékokat szolgáltattak e megközelítésben rejlő lehetőségek alátámasztására. Először három heti T-sejt-infúzió biztonságos, akut toxicitás, akut vagy krónikus GVHD den, vagy a már meglévő GVHD láza nélkül, 1-2x106 vírusspecifikus T-sejt/kg/adag dózisban. hatásosak voltak a hagyományos terápiákkal kudarcot valló EBV-limfómák és CMV-fertőzések eltávolításában, tartós CR-t indukálva az EBV-limfómás betegek 68% -ában, akik nem reagáltak a Rituxanra, 53 és a CMV-fertőzésben szenvedő vagy tartósan szenvedő betegek több mint 86% -ában. virémia, amely nem reagált a ganciklovirra, a foszkarnetre és/vagy a cidofovirra. 55
A CM-specifikus T-sejtek, ebben az esetben a CMLApp-peptidekre specifikus T-sejtek, a HLA B0702 által bemutatott korlátozások.
Teljes méretű kép
Mivel a CMV-fertőzések túlnyomórészt a gazdaszöveteket befolyásolják, a CMV-fertőzések a HLA-grafttal kimerült T-sejt-transzplantált betegek 59-szeresének magasabb mortalitási gyakoriságával is társulnak, mint az azonos HLA-T-sejtekkel rendelkező, hasonló feltételű TLA-transzplantációs sejtekben. Megvizsgáltuk, hogy az immunodomináns, HLA-korlátozott T-sejt-válasz korlátozásai hozzájárulhatnak-e az életveszélyes CMV-fertőzések ilyen gyakoribb előfordulásához. A T-sejt-szegény graftok, amelyek általában 2-20x103 érett T-sejtet/kg visznek a gazdaszervezetbe, várhatóan csak kis számú vírusspecifikus immunodomináns CTL-prekurzort visznek át, amelyeket 1/10 1 frekvencián detektálnak 1/10 4 T-sejt a látensen fertőzött szeropozitív donorok vérében. Előzetes eredményeink azt mutatják, hogy a HLA-haplotípus-inkonzisztens donorokból előállított CMVpp65-specifikus T-sejtek korlátozódhatnak azokra a HLA-allélokra, amelyekben a gazdaszervezet nem osztozik az esetek legfeljebb felében, és hogy súlyos betegség szinte kizárólag ez a töredék.címzettek. 61
E korlátozások kezelése és a transzplantáció utáni vírusfertőzések hatékonyabb kezelése érdekében, mind a HLA-sejtek kimerülésében szenvedő HLA-betegeknél, mind azoknál a betegeknél, akik HLA-transzplantátumot kaptak, amelyek részben megegyeznek a köldökzsinórvérrel, vagy a szeronegatív páros csontvelő- vagy PBSC-transzplantációval donorok., csoportunk harmadik fél donorokra specifikus, részben megfelelő HLA-sejtek alkalmazását vizsgálta, amelyeket korábban epitóp-specifitásuknak és HLA-restrikciójuknak jellemeztek.
Összegzésképpen elmondhatjuk, hogy az allogén HCT súlyosan kimerült T-sejtek és az elviselhető myeloablatív kemoterápia után adják be az akut és krónikus GVHD következetes betartását és alacsonyabb előfordulását anélkül, hogy fokozódna a relapszus az akut leukémia miatt átültetett betegeknél. Az ilyen transzplantációk ígéretes platformot jelentenek a tumor- és kórokozó-specifikus sejtek immunterápiáihoz. A leukémia-reaktív T-sejtek adaptív transzmissziója remissziókat indukálhat azoknál a betegeknél, akik az átültetés után visszaesnek, és jelenleg a betegség kiújulásának megakadályozása érdekében vizsgálják. A transzplantációs donorból generált vagy harmadik fél donorából kiválasztott vírusspecifikus T-sejtek adoptív transzferje a betegek nagy részében az EBV limfómák maradandó remisszióját és a gyógyszerrezisztens CMV fertőzést is kiválthatja. HLA-fegyelmezett recipienseknél történő következetes sikeres alkalmazásuk azonban a vírusspecifikus T-sejtek gondos kiválasztását igényli, mindkettőt korlátozzák a fertőzött sejtek által expresszált HLA-allélok, és specifikusak az ezen allélok által bemutatott epitópokra.