különféle

  • elemeket
  • absztrakt
  • Háttér:
  • mód:
  • az eredmények:
  • következtetés:
  • A fő
  • az eredmény
  • Az enzastaurin gátolja a humán NSCLC sejtek növekedését
  • Az enzastaurin befolyásolja a sejtek migrációját és invázióját
  • A génexpresszió változásainak elemzése enzimkezelés után
  • Az enzastaurin gátolja az u-PAR génexpressziót az NSCLC sejtekben
  • Az u-PAR leütése újra érzékenyíti az NSCLC sejteket és apoptózist indukál az Enz-en
  • Enzastaurin in vivo csökkenti a távoli NSCLC sejt metasztázisokat
  • vita
  • A változások története
  • További információ
  • Powerpoint fájlok
  • További 1. ábra
  • További 2. ábra
  • További 3. ábra
  • További 4. ábra
  • Word dokumentumok
  • 1. kiegészítő táblázat
  • 2. kiegészítő táblázat
  • 3. kiegészítő táblázat
  • További képmondák

elemeket

  • biomarkerek
  • Génszabályozás
  • Molekulárisan célzott terápia
  • Nem kissejtes tüdőrák

Ez a cikk frissült

absztrakt

Háttér:

Az enzastaurin (Enz) egy szerin/treonin kináz inhibitor, amely blokkolja a protein kináz C (PKC) ß/AKT-t. Ennek a vegyületnek a rákinváziót és áttétet gátló képességét azonban még nem sikerült teljesen tisztázni.

mód:

Az Enz inváziót, metasztázisokat és a célmolekulákat gátló képességét nem kissejtes tüdőrákban (NSCLC) vizsgáltuk mikroarray, Matrigel és in vivo chorionallantoos membrán (CAM) vizsgálatokkal RT-PCR-rel.

az eredmények:

Az enzastaurin szignifikánsan csökkentette a különféle NSCLC sejtvonalak migrációját, invázióját, valamint in vivo tüdő- és májmetasztázisokat (CAM assay). A rák progresszióját elősegítő gének (u-PAR, VEGFC és HIF1α) és a daganat szuppressziója (VHL, RASSF1 és FHIT) NSCLC szignifikánsak voltak (P -1 -1) a sejtszedés előtt. Ennek eredményeként azt tapasztaltuk, hogy az Enz-kezelés gátolhatja a PKC, AKT, p42/44 és GSK3β foszforilációját EGF jelenlétében és hiányában (1C. Ábra, 1. kiegészítő ábra).

Az enzastaurin gátolja az NSCLC proliferációt, migrációt és inváziót. ( A ) NSCLC sejtproliferáció Enz-kezelés után. Az adatokat a kontroll (DMSO-val kezelt) sejtek százalékában fejezzük ki. Pontok, három kísérlet átlaga ± sd. Az Enz által kapott IC50-értékeket az összes vizsgált NSCLC sejtvonalra a dobozban mutatjuk be. ( B ) H460, A549, H1299 apoptózis elemzése Enz-kezelés után. 48 órás Enz-kezelés után a sejteket áramlási citometriával szűrtük, és az apoptotikus sejtek százalékos arányát kiszámítottuk a DMSO-val kezelt sejtekhez képest. ( C ) EGF-fel, Enz-tel vagy mindkét reagens kombinációjával kezelt sejtek Western blot-analízise. Az említett molekulák elleni specifikus antitesteket anti-béta-aktinnal együtt használtuk terhelés kontrollként. ( C a D ) A vándorló sejtek (gyógyulási teszt) és az invazív sejtek százalékos aránya (Matrigel-teszt). A sejteket az Anyagok és módszerek részben leírtak szerint kezeltük. DMSO-val kezelt minták szolgáltak kontrollként (100%), és más kezelt mintákat kiszámoltunk és ábrázoltuk ennek az értéknek a százalékában. * P

Az enzastaurin a tumor szuppresszor gének expresszióját indukálja. Számszerűsítés ( A ) VHL, B ) RASSF1 a ( C ) FHIT FHIT H460 és A549 sejtekben valós időben, 24-48 órás kezelés után DMSO-val vagy Enz-szel (IC50). A relatív génexpressziót normalizáltuk a β-aktin mRNS-sel szemben. * P

Az enzastaurin hatása a pro - invazív gének expressziójára. PCR-számszerűsítés ( A ) HIFla, ( B ) VEGFC és ( C u-PAR a H460, A549 és H1299 sejtekben valós időben, 24-48 órás kezelés után DMSO-val vagy Enz-sel (IC50). A relatív génexpressziót normalizáltuk a β-aktin mRNS-sel szemben. * P

Az enzastaurin gátolja az u-PAR promóter aktivitását és az u-PAR fehérje expresszióját. ( A ) Az összes u-PAR fehérje ELISA-val értékelve, az Anyagok és módszerek szerint. Mindegyik érték a három párhuzamos mérés átlagát jelenti. ( B ) A luciferáz aktivitás meghatározása H460, A549 és H1299 sejtekre. Az adatokat három független kísérlet négy-négy ismétlésben végzett átlagának ± sd-ként adjuk meg. * P

Az enzastaurin in vivo gátolja az NSCLC metasztázisokat. ( A - C ) Különböző Enz (2 vagy 4 μM) vagy DMSO koncentrációval intravénásán kezelt csirke embriók májában és tüdejében található metasztatikus sejtek száma. A humán Alu szekvenciákat valós idejű PCR-rel amplifikáltuk és számszerűsítettük. ** P * P ~ 0,05.

Teljes méretű kép

vita

Ez a tanulmány azt mutatja, hogy az Enz gátolja a migrációt, az inváziót és az in vivo metasztázisokat az NSCLC-ben, és megvizsgálja az első mechanizmusokat, amelyek hozzájárulnak az Enz által kiváltott migráció, invázió és metasztázis gátlásához az NSCLC-ben. Megmutattuk, hogy az Enz transzkripciósan gátolja az u-PAR génexpressziót, lebontja a tumor progressziójához kapcsolódó HIF1 α és VEGFC molekulákat, és szabályozza a daganatot elnyomó VHL, RASSF1 és FHIT géneket is. Eredményeink arra utalnak továbbá, hogy az si-u-PAR/sh-u-PAR leütés érzékenyíti a rezisztens NSCLC sejteket Enz-re és apoptózist indukál. Ezek a megállapítások arra utalnak, hogy az NSCLC-s betegek Enz-kezelése hozzájárulhat a túlélés növekedéséhez azáltal, hogy gátolja a tumor progressziós génjeit és indukálja a tumor szuppresszor génjeit.

Munkánk során kimutattuk, hogy az Enz in vivo gátolja a máj és a tüdő távoli metasztázisait egy CAM-vizsgálatban. Pro-apoptotikus, növekedést gátló és antiangiogén tulajdonságai mellett (Keyes és mtsai, 2002; Graff és mtsai, 2005; Querfeld és mtsai, 2006; Willey és mtsai, 2009), ez legalábbis A daganat progressziója és inváziós génjei (u-PAR, HIF1a és VEGFC gének), valamint az NSCLC szuppresszor gének (FHIT, RASSF1 és VHL) Enz általi szabályozása. Nem valószínűnek tartjuk, hogy az Enz metasztázis gátlásának fő mechanizmusa antiangiogenezissel magyarázható, mivel azt találtuk, hogy a DMSO-ba vagy az Enzbe merített dugók nem mutattak szignifikáns különbséget a felső CAM embrionális érrendszerének kialakulásában (adatok Látható). Az Enzo antiangiogén komponense azonban modellünkben az antimetasztatikus aktivitás összefüggésében biztosan nem zárható ki teljesen.

Összességében ez az első átfogó elemzés, amely Enz-kezelés után megvizsgálja a differenciálisan szabályozott géneket az NSCLC-sejtekben, és új Enz-célokat von be a migráció, az invázió és a távoli áttétek összefüggésében az NSCLC-ben. Eredményeink azt sugallják, hogy Enznek nagy szerepe van az u-PAR Sp1/Sp3 és c-Jun (AP-1) szabályozásában, a HIF1 és VEGFC mellett, amelyek a tumor növekedésében és metasztázisban vesznek részt, a daganattal párhuzamosan. elnyomásszabályozás. releváns az NSCLC szempontjából. Ezenkívül az u-PAR leütése újra érzékenyíti az NSCLC sejteket az Enz kezelésre. Ezek az eredmények fontos információkat nyújtanak az Enz-szel NSCLC-ben szenvedő betegeknél folyamatban lévő klinikai vizsgálatokhoz, valamint az Enz-vel kezelt betegek resz szövet- vagy vérmintáit vizsgáló egyéb vizsgálatokhoz, például szérumban oldódó u-PAR-hoz vagy u-PAR-hoz (Henic et al, 2008), mint potenciálisan javasolja a kezeléssel szembeni rezisztencia klinikailag releváns markerét.