absztrakt

A gránátalma kivonat (PLE) elhízás elleni hatásainak vizsgálata a zsíros étrend és a hiperlipidémia által kiváltott elhízás egér modelljében.

tervezés:

Az elhízás elleni kísérlethez az ICR egereket és a hím ICR egereket magas zsírtartalmú étrenddel etették az elhízás kiváltása érdekében. Amikor a magas zsírtartalmú csoport súlya 20% -kal magasabb volt, mint a normál étrend csoportban, az állatokat 5 hétig 400 vagy 800 mg/kg/nap PLE-vel kezeltük. A testsúlyt és a napi táplálékfelvételt a kísérleti időszak alatt rendszeresen mértük. 5 hét elteltével különféle zsírpárnákat kezeltünk, és a PLE után megmértük a szérum teljes koleszterinszintjét (TC), a trigliceridet (TG), a glükózt és a nagy sűrűségű lipoproteint (HDL-C). A zsírabszorpciós kísérletben a normál és az elhízott egerek egyaránt 0,5 ml lipidemulziót és PLE-t kaptak 800 mg/kg dózisban egyszerre. A szérum TG-szinteket a kezelés után 1, 2, 3, 4 és 6 órával mértük. A lipid emulzió orális beadását egereknek a széklet ürülékeiben mértük. A PLE és izolált vegyületeinek (ellagsav és csersav) hasnyálmirigy lipáz aktivitására gyakorolt ​​hatásait in vitro vizsgáltuk .

az eredmények:

A PLE-vel kezelt csoportok szignifikáns csökkenést mutattak a testtömegben, az energiafogyasztásban és a zsír- és szérumtömeg, a TC, TG, a glükózszint és a TC/HDL-C arány különböző százalékában 5 hét kezelés után. Ezenkívül a PLE jelentősen csökkentette a szérum TG szintjének növekedését, és gátolta a bél zsírfelszívódását egerekben, a szájon át adott zsíremulzióval. A PLE szignifikáns különbséget mutatott az elhízott, magas zsírtartalmú étrenddel táplált egerek ízének csökkenésében, de a normál étrenddel etetett egerekben nem mutatott hatást.

következtetés:

A PLE gátolhatja az elhízás és a hiperlipidémia kialakulását elhízott, magas zsírtartalmú egerekben. Úgy tűnik, hogy a hatásokat részben a hasnyálmirigy lipáz aktivitásának gátlása és az energiafelvétel elnyomása közvetíti. A PLE új étvágycsökkentő lehet, amely csak a magas zsírtartalmú étrend okozta elhízást érinti.

Az elhízás a legelterjedtebb anyagcsere-betegség a fejlett országokban, és az elmúlt években globális járványsá vált. 1 Különböző krónikus betegségekkel társul, beleértve a hiperlipidémiát, a diabetes mellitust, a szívkoszorúér betegségeket és a rák egyes típusait. Ezenkívül az elhízás, különösen a hasi elhízás, diszlipidémiával társul, amelyet a megnövekedett trigliceridek (TG) és a csökkent magas sűrűségű koleszterin (HDL-C) lipoprotein szint jellemez. Ismeretes, hogy a túlzott zsírellátás az egerek elhízásának kialakulásával jár. A magas zsírtartalmú étrend tartós táplálkozása elhízást okozhat hyperphagia, hyperglukonemia, hyperlipidaemia és inzulinrezisztencia mellett. 4, 5 Ezenkívül úgy gondolják, hogy a magas zsírtartalmú étrend által kiváltott elhízás hozzájárulhat a fehér és barna zsírsejtek fokozott növekedéséhez. 6.

kísérletileg

Női és hím CD-1 (ICR) egereket (3 hetes korban) a Beijing Vital River Laboratory Animal Technological Company-tól (Peking, Kína) szereztünk be. 1 hétig 12/12 órás világos/sötét ciklusban helyezték el őket hőmérséklet és páratartalom szabályozott helyiségben, és szükség esetén lazán etették a szokásos laboratóriumi chow vizet. A szokásos laboratóriumi takarmány (tömegszázalékban) körülbelül: 4% zsírt, 24% fehérjét, 65% szénhidrátot és magas zsírtartalmú étrendet tartalmaz: 15% sertészsír (telített zsírok), 20% olívaolaj (többszörösen telítetlen zsírok), 35% zsír. % fehérje, 15% szénhidrát, 0,5% vitamin keverék, 3% ásványi anyag keverék és 5% koleszterin (elsősorban tojássárgája). Mindkét csirkét a Kínai Orvostudományi Akadémia laboratóriumi állatintézetéből (SCXK Jing 2001-0003) is beszerezték.

anyagok

PLE-t (10,6% ellagsavat tartalmaz, laboratóriumunkban készített, 040818 belépési számmal) felhasználtunk, és kuponmintát (031006) tároltunk laboratóriumunkban későbbi felhasználás céljából. A TG, glükóz, HDL-C és TC tesztkészleteket a Beijing Zhongsheng High-tech Bioengineering Company-tól (Peking, Kína) vásároltuk. A lipid emulziót a Beijing Green Cross Company-tól (Peking, Kína) vásároltuk.

mód

A PLE hatása az egerek elhízására, amelyet magas zsírtartalmú étrend vált ki

A PLE hatása az étvágyra normál vagy magas zsírtartalmú étrendben táplált egerekben

Az egereket véletlenszerűen négy csoportra osztottuk (csoportonként hét hím egeret és hét nőstény egeret): a magas zsírtartalmú étrend és a PLE csoport, a magas zsírtartalmú kontrollcsoport, a normál étrend és a PLE csoport, valamint a normál étrend csoport. A PLE csoportokat orálisan adtuk PLE szondával 800 mg/kg/nap dózisban 5 hétig. A testtömeget és az étkezés mennyiségét hetente ellenőriztük. A kísérlet végén megmértük a testhosszat, és különféle zsírpárnákat távolítottunk el.

A PLE hatása a szérum TG szintjére normál egerekben egyszeri orális lipid emulzió beadása után

A hím ICR egereket (20,03 ± 1, 97 g) három csoportra osztottuk, mindegyik csoport a testtömegnek (n = 6) felel meg. A lipidemulziót 5 ml olívaolajjal és 10 ml 1% -os Tween-20 oldattal 10 percig ultrahanggal kezeltük. Miután az összes egér 12 órán át éhezett, orális lipid emulziót kaptak 0,5 ml/egér dózisban (0,046 mmol TG-t tartalmazott). Ugyanakkor a PLE csoport orális PLE-t kapott 800 mg/kg dózisban, a csersavcsoport csersavat kapott 200 mg/kg dózisban, a kontroll csoport pedig ugyanolyan mennyiségű vizet kapott. A lipid emulzió beadása után 0, 1, 2, 4 és 6 órával soros vérmintákat vettünk az orbitális sinusból. A szérumot 4 ° C-on végzett centrifugálással elválasztottuk, és későbbi TG-vizsgálat céljából -20 ° C-on tároltuk.

A PLE hatása elhízott egerek szérum TG szintjére lipid emulzió orális beadása után

A magas zsírtartalmú étrend által kiváltott elhízott ICR egereket (hímek, 39, 9 ± 2,77 g) két csoportra osztottuk, egy PLE csoportra és egy kontroll csoportra, amelyek mindegyike a testtömegnek felel meg (n = 6). A normál csoportot standard laboratóriumi chow-val etették. A lipid emulziót a fent leírtak szerint állítottuk elő. A lipid emulzió (0,5 ml/egér) gyomor általi átitatását követően a PLE csoportnak 800 mg/kg dózisban adtuk be a PLE-t, és mind az elhízott kontrollcsoport, mind a normál csoport normál sóoldatot kapott. Soros vérmintákat vettünk az orbitális sinusból, miközben az egereket éterrel altattuk 0, 1, 2, 4 és 6 órával a lipid emulzió beadása után. A szérumot 4 ° C-on végzett centrifugálással elválasztottuk és -80 ° C-on tároltuk a későbbi vizsgálatokhoz.

A PLE hatása a teljes zsírfelszívódásra normál egerekben egyszeri orális lipid emulzió beadása után

A hím ICR egereket (19, 56 ± 1, 48 g) négy csoportra osztottuk (n = 6). 12 órás éhezés után kapták a lipid emulziót zsákolással, 0,5 ml/egér dózisban. A lipid emulziót a fent leírtak szerint állítottuk elő. Ugyanakkor, amikor a PLE csoport orális PLE-t kapott 800 mg/kg dózisban, a csersavcsoport csersavat kapott 200 mg/kg dózisban, az ellaginsav csoport ellaginsavat kapott 200 mg dózisban/kg. 80 mg/kg és a kontrollcsoport azonos térfogatú vizet kapott. Ezt követően standard rágcsáló-chow-t adtunk be 1,0 g/egér mennyiségben. Az ürüléket a következő 12 órán át gyűjtöttük, és egy éjszakán át szobahőmérsékleten levegőn szárítottuk. Mindegyik ürülékmintát lemérjük, és porrá őröljük. A székletben lévő zsír mennyiségét Kamera és mtsai. 18 és az étkezési zsír felszívódását a bevitt zsír százalékában fejeztük ki.

A PLE hatása a hasnyálmirigy lipáz aktivitására in vitro

A hasnyálmirigy lipáz aktivitását a TG-ből származó szabad zsírsav felszabadulás sebességének mérésével határoztuk meg. Először a lipidemulziót 0,1 M Tris-HCl pufferral (pH 8, 4) hígítottuk, így 30 μM TG végkoncentrációt kaptunk. A hígított emulziót (0,1 ml) 0,05 ml hasnyálmirigy-lipázzal (végkoncentráció 5 U/cső) és 0,1 ml különböző koncentrációjú mintaoldatokkal inkubáltuk 15 percig, 37 ° C-on. A hasnyálmirigy-lipáz aktivitását millimol zsíros milliliter reakcióelegyben felszabaduló sav. A zsírsav felszabadulás sebességét máshol írják le. 19.

Statisztikai analízis

Az összes értéket átlag ± SD értékként adjuk meg. Az egércsoportok közötti statisztikai összehasonlítást SPSS szoftverrel számoltuk. Az adatok elemzéséhez a Dunnett-féle teszt varianciaanalízisét használtuk, és a statisztikai szignifikancia kritériuma P volt

kivonat

A PLE hatása a testtömegre azokban az egerekben, amelyeket 5 hétig tápláltak magas zsírtartalmú étrenddel. ( a ) Hím egerek n = 6; ( b ) nőstény egerek (n = 5, az 5. csoportnak négy egere volt). 1. csoport: magas zsírtartalmú étrend; 2. csoport: magas zsírtartalmú étrend plusz PLE 800 mg/kg; 3. csoport: magas zsírtartalmú étrend plusz PLE 400 mg/kg; 4. csoport: magas zsírtartalmú étrend és szibutramin 4,6 mg/kg; 5. csoport: normál étrend. * P ** P

A PLE hatása a szérum TG koncentrációjára normál egerekben per os lipid emulzió beadása után (n = 6). Lipid emulziók (négyzet alakú) csoportja; (kör) lipidemulzió plusz PLE csoport 800 mg/kg; (háromszög) Lipidemulzió plusz csersav 200 mg/kg. * P ** P

A PLE hatása az elhízott egerek szérum TG koncentrációjára lipid emulzió orális beadása után (n = 6). (Négyzet alakú) magas zsírtartalmú csoport; (kör) normál étrend csoport; (háromszög) Magas zsírtartalmú étrend plusz PLE csoport 800 mg/kg. * P ** P 2 PLE csökkentette mind a diszlipidémiát, mind az elhízás kardiovaszkuláris kockázati tényezõit, mivel a kontroll egerekhez viszonyítva a hasi zsír tömegszázalékának és a szérum TG szintjének különösen jelentõs csökkenését mutatta.

Ez a tanulmány azt is kimutatta, hogy a PLE új fejlett energia-visszaszorító lehet. Elhízott, magas zsírtartalmú, magas zsírtartalmú egereknél a PLE energiafogyasztásra gyakorolt ​​hatása hasonló volt a klinikán alkalmazott sibutramin étvágycsökkentő hatásához. A PLE jelentősen csökkentheti a magas zsírtartalmú étrendben táplált egerek kalóriabevitelét; ugyanakkor a PLE ízét a normál étrenddel etetett egerekben nem utolsósorban befolyásolta. Amikor az egerek napi aktivitását figyeltük, kiderült, hogy a PLE-csoportok kevésbé aktívak, mint a sibutramin-csoportok. Azt is javasolta, hogy a PLE étvágycsökkentő hatásmechanizmusa eltérhet a szibutramintól. Feltételezzük, hogy szoros affinitása lehet a magas zsírtartalmú étrend okozta elhízással szemben. A magas zsírtartalmú étrenddel táplált egerek étvágyának PLE hatásmechanizmusa még mindig nem ismert, és további vizsgálatokra van szükség.

Összegzésképpen elmondható, hogy a PLE jelentős hatással volt az elhízás és a hiperlipidémia kialakulásának gátlására a magas zsírtartalmú étrendet tápláló elhízott egerekben. Felmerült, hogy az energia bevitelének elnyomása és az étkezési zsír bélben történő felszívódásának gátlása a hasnyálmirigy lipáz aktivitásának gátlásával két lehetséges mechanizmus lehet a PLE elhízás elleni hatásának.