absztrakt

A fő

A hepatitisben szenvedő betegek molekuláris klónozásával nemrégiben felfedeztek egy új, flavi-szerű RNS-vírust, amelyet GB virus-C (GBV-C) vagy HGV-nek hívnak (1, 2). Noha a vírus szerepe az AE vagy más betegségek felnőttkori hepatitisz kiváltásában felnőtteknél továbbra is ellentmondásos, korábbi kutatások kimutatták, hogy a HGV főleg parenterális úton terjed, például vérátömlesztéssel, drogfogyasztással, hemodialízissel és plazmatermék infúzióval (2). –5). Más lehetséges utak, mint például az anya-csecsemő (6-8), a szexuális és a háztartási horizontális átvitel, még mindig vizsgálódnak.

hepatitis

Mivel az akut HGV-fertőzésre még nem áll rendelkezésre megfelelő szerológiai teszt, a szelekció módszere továbbra is a szelekció módszere a vírusgenomok reverz transzkripció-PCR teszt alkalmazásával történő azonosításával.

A HGV fertőzéssel kapcsolatban korábban publikált legtöbb tanulmányt felnőtteknél végezték. A HGV-fertőzés prevalenciáját gyermekeknél nem igazolták kellőképpen. HGV RNS-t kimutattak veszélyeztetett gyermekeknél (9). Egyes jelentések szerint a HGV-fertőzést fiatalabb korban szerezték meg, mint más ismert vírusos hepatitis-típusok (10, 11). A gyermekek HGV-fertőzésének vizsgálata elősegíti a vírus terjedésének és klinikai jelentőségének tisztázását. Ezért ezt a vizsgálatot normál egyéneknél, valamint olyan gyermekeknél végezték el, akik nyílt szívműtét miatt vérátömlesztést kaptak.

mód

Tárgyak . 200 egészséges gyermeket, 100 fiút és 100 lányt vizsgáltak 6 és 12 év közötti, szülői beleegyezéssel. 1990 októberétől 1992 decemberéig folytatták a transzfúziós hepatitis prospektív vizsgálatát, összesen 94 gyermek bevonásával. Azokat a gyermekeket, akiknek széruma kimutatható anti-HCV-t tartalmazott, valamint azokat, akiknek a transzfúziót megelőzően kóros májfunkciója volt, kizárták ebből a vizsgálatból. A szérumokat a műtét előtt, valamint a műtét után 1, 3, 6 és 12 hónappal gyűjtötték össze. A HCV-fertőzés hatásairól már beszámoltak (12). Ezen alanyok közül harmincnyolcat vontak be az anti-HCV szűrés elé 1992 júliusa óta, míg a fennmaradó 56 gyermeket a szűrés után.

A vírus nukleinsav szennyeződésének és lebomlásának megakadályozása érdekében a szérummintákat gondosan aliquotizáltuk, és -80 ° C-on tároltuk. A szérum ALT aktivitást automatizált analizátorral mértük. Az anti-HCV-t kereskedelemben kapható második generációs ELISA-val (Hepatitis C II; Abbott Laboratories, North Chicago, IL) teszteltük. A hepatitis B vírus felszíni antigénjeit az RIA (Abbott Laboratories) ellenőrizte. A pozitív HGV RNS-ben szenvedő betegeket a műtét után 5 évvel megfelelően tájékoztatták és tesztelték a HGV RNS szempontjából.

PCR teszt . Az RNS-t 50 μl szérumból extraháltuk egylépéses guanidinium-tiocianát-fenol-kloroform módszerrel (13). Az izolált RNS-t reverz átírással írtuk le a fent leírtak szerint 200 pmol random hexamerrel (Promega Corp., Madison, WI) és reverz transzkriptázzal (Superscript, GIBCO BRL Eggenstein, Németország) 42 ° C-on 45 percig, és 72 ° C-on inaktiváltuk. C 15 percig (12). A beágyazott PCR-t az 5'-nem-transzlált régióból származó primerekkel hajtottuk végre (14). 5 percig tartó 94 ° C-os meleg indítás után 30 ciklus PCR-reakciót hajtottunk végre denaturálással 30 másodpercig 94 ° C-on, 30 másodpercig hőkezeléssel 55 ° C-on és 1 percig hosszabbítással 72 ° C-on. A PCR-t ugyanúgy végeztük. Tíz mikroliter beágyazott PCR-terméket 2% -os agarózgél-elektroforézisnek vetünk alá és etidium-bromiddal festünk. A beágyazott PCR-termékek 210 bázispár. Szigorú eljárásokat követtek a szennyeződés elkerülése érdekében az egész PCR-folyamat során (15). A reverz transzkripciós PCR minden fordulójában szérum pozitív és negatív kontrollokat alkalmaztunk, és mindegyik mintához két külön vizsgálatot végeztünk.

Statisztika . A statisztikai elemzéshez a Yates korrekcióval végzett χ 2 tesztet és a Mann-Whitney U tesztet használtuk. P érték (2–4, 16–18) és a terhes nők 2, 1% -a (8). A jelenlegi adatok azt mutatják, hogy a HGV viremia prevalenciája normális gyermekeknél nem különbözött szignifikánsan a felnőtt populáció prevalenciájától, ugyanakkor magasabb volt, mint a gyermekek anti-HCV prevalenciája (19). Dokumentálták, hogy az anya-gyermek HGV-fertőzés nagyobb gyakorisággal fordult elő, mint a HCV, 30-50% -os átviteli sebességgel (6-8), és ezeknél a fertőzött gyermekeknél valószínűleg tartós fertőzés alakul ki. Ez lehet az oka a HGV RNS kimutatásának magas arányában egészséges gyermekeknél. További vizsgálatokra van szükség, mind PCR, mind szerológiai vizsgálatok segítségével, a valódi prevalencia arányának meghatározásához a jelenlegi és a korábbi fertőzések kimutatásával.

A krónikus HGV-fertőzések a korábbi jelentésekben gyakoriak voltak felnőtt betegeknél, 38 és 90% között (2, 4, 16, 17). A HGV RNS perzisztenciája gyermekeknél 6 hónap múlva 96%, 1 év múlva 65% ebben a vizsgálatban. Megfigyelték, hogy minél fiatalabbak a betegek, annál valószínűbb, hogy krónikus hordozóvá válnak, ha egyszer HGV-vel fertőzöttek. Vizsgálatunkban a vírus kiürülését 1 éves transzfúzió után ritkán figyelték meg. A HGV viremia fennmaradását ezeknél a gyermekeknél legfeljebb 5 évig figyelték meg. Az időtartam meghosszabbítható, ha a szállító gyermekeit hosszabb ideig ellenőrzik. Úgy tűnik, hogy a vírus HGV-fertőzés utáni eltávolításának képességét befolyásolja a betegek életkora.

A gyermekek HGV magas aránya ellenére ezek közül a fertőzöttek közül egyikben sem alakult ki transzfúziós hepatitis. Ezzel szemben a HCV-fertőzött gyermekek, valamint a HBV-fertőzötteknél akut vagy krónikus hepatitis alakult ki. Betegeinknél nem figyelték meg a HGV hepatotróf hatását. A transzfúzió utáni hepatitis oka a másik két beteg esetében továbbra sem ismert.

A HGV fertőzéseket nem mindig kíséri HCV. Az izolált HGV-fertőzések gyakoriak gyermekgyógyászati ​​betegeknél. Bármely kísérlet a HGV-fertőzött személyek felkutatására csak olyan betegek tesztelésével, akiknél korábban már volt HCV- vagy HBV-fertőzés, vagy kóros májműködésű betegeknél, csak a HGV-fertőzött esetek töredékét tárja fel.

Bár a HGV-fertőzés aránya az anti-HCV-szűrés bevezetése után 35% -ról 22% -ra csökkent, a különbség statisztikailag nem volt szignifikáns. Eredményeink azt sugallják, hogy az anti-HCV szűrés nem akadályozhatja meg a HGV fertőzéseket, mivel a normális populációban a HGV fertőzések dominálnak, mivel a HCV fertőzések és az izolált HGV fertőzések gyakoriak.

Röviden, a HGV virémia nem ritka a látszólag normális gyermekeknél, és magasabb, mint az anti-HCV prevalenciája. A nyílt szívműtéten átesett gyermekeknél nagyobb a HGV-fertőzés kockázata, mint a felnőtteknél. A HGV-fertőzés az 5 éves utánkövetés során nem okozott klinikai hepatitist. Habár a HGV krónikus virémiájában szenvedő gyermekek jelentős részéről beszámoltak, hosszú távú eredményüket felül kell vizsgálni.