nagyszerű

Noha az új koronavírus globális járványának első hullámát hazánk sikeresen kezelte, a jelenlegi fejlődés és a gazdaság nyitásával járó növekvő betegségesetek a második hullám kezdetét jelzik. A tesztelés továbbra is kulcsszerepet játszik az általános SARS-CoV-2 koronavírus-monitorozó rendszer összefüggésében. Ezért úgy döntöttünk, hogy nagyobb figyelmet fordítunk rá.

Rendelkezésre álló technológiák a COVID-19 teszteléséhez

A COVID-19 számára jelenleg többféle teszt áll rendelkezésre. Jelentős összegeket költenek újak fejlesztésére is. Megpróbáljuk elmagyarázni Önnek, hogyan működnek az egyes tesztek, mik azok előnyei és hátrányai, és mire használják őket.

Általában a tesztek két nagy csoportját különböztetjük meg:

  • A diagnosztikai tesztek kimutatják a vírus jelenlétét a szervezetben, és azonosítják a folyamatban lévő fertőzést. A COVID-19 fertőzés megerősítésére használják őket. A garat és az orrgarat tamponját használják. Patia sem:

- molekuláris tesztek (RT-PCR, RT-qPCR, NAAT)
- antigéntesztek

  • Szerológiai teszteket (antitest teszteket) használnak a koronavírus fertőzésének múltbeli lehetőségének meghatározására. Ezek a tesztek kimutatják az antitestek jelenlétét a vérben, vagyis a szervezet immunválaszát, amely csak hetekkel jelentkezik a betegség tüneteinek megjelenése után. Meg tudják határozni a populáció fertőzésének szintjét, de nem tudják elég korán észlelni a betegséget a betegség diagnosztizálása és az érintkezések megtalálása céljából.

Elemezzük külön-külön az egyes típusokat.

Molekuláris tesztek

Ezek a PCR, qPCR, RT-PCR néven ismert tesztek kimutatják egy vírus vagy vírus nukleinsav (RNS vagy DNS) genetikai anyagának jelenlétét.

  • A DNS - dezoxiribonukleinsav - olyan molekula, amelyben a legtöbb élő szervezet tárolja genetikai kódját. A DNS információkat tartalmaz, amelyeket a sejtek felhasználnak a fehérjék előállításához.
  • Az RNS - ribonukleinsav - több funkciót lát el, de fő feladata a genetikai információk másolása a DNS-ből (transzkripció) a fehérjék előállítása érdekében (transzláció).

A PCR (polimeráz láncreakció) nagyon megbízható, érzékeny, ezért gyakran alkalmazott módszer bármely mikroorganizmus, vírus vagy baktérium genetikai anyagának (DNS vagy RNS) nyomainak kimutatására. Ezt a technológiát több mint 30 éve használják. A PCR képes megragadni a gén specifikus génjeit a torok- és orr-tamponokból származó genetikai anyagból, és kémiai reakcióval megsokszorozhatja, hogy fluoreszcens festékkel megfogható legyen. Ezért a polimer láncreakció neve.

Ennek a módszernek az RT-PCR (reverz transzkripciós PCR) néven ismert változatát alkalmazzák a koronavírus SARS-CoV-2 jelenlétének kimutatására. Ennek oka, hogy a koronavírus SARS-CoV-2, mint néhány más vírus, nem tartalmaz DNS-t, csak RNS-t tartalmaz. Amikor az emberi test megfertőződik ilyen vírussal, valójában behatol az emberi test egészséges sejtjeibe, amelyek az RNS-t termelik, és úgy manipulálják őket, hogy azok ne emberi fehérjét, hanem a vírus fehérjéit termeljék. Ezekből vírusgyárak lesznek.

Egy enzimet alkalmaznak a vírus RNS kimutatására, amely a vírus RNS-ét átalakítja DNS-vé. Ez egy egylépéses folyamatban történik, az úgynevezett reverz transzkripció. Ezt követően a folyamat úgy folytatódik, mint a PCR-ben, a vírus DNS-ét milliószor megszorozzuk és fluoreszcens festékkel detektáljuk. Ez a módszer nagyon megbízható, mert a garat- vagy nasopharyngealis tampon egyetlen részecskéje elegendő a vírus testben való jelenlétének kimutatására.

Mit jelentenek a teszt eredményei?

  • Az alany akut COVID-19 fertőzésben szenved.

  • A tesztalany jelenleg nem fertőzött a vírussal.
  • A vírus nincs jelen azon a helyen, ahol a tampont vették (ezért alapból mintát vesznek az orrból és a szájból is). Egy későbbi szakaszban a vírus alacsonyabban halad, és bár jelen van a tüdőben, a garatban és az orrgaratban nem található meg.
  • A betegség túl korai, vagy már megtörtént és túl késő. A negatív eredmény nem azt jelenti, hogy a teszt holnap, vagy néhány nap múlva, illetve kockázati tényezők jelenlétében negatív lesz. a tünetek megjelenése után meg kell ismételni.

Melyek az RT-PCR módszer előnyei és hátrányai?

Az RT-PCR egy nagyon érzékeny, robusztus és jól dokumentált módszer. Az RT-PCR jelenleg a legmegbízhatóbb módszer a COVID-19 diagnosztizálására. Ez a módszer szintén kevésbé hajlamos a szennyezésre, mivel az egész folyamat zárt csőben zajlik.

Legfőbb hátránya, hogy speciális felszerelést és személyzeti képzést igényel, ezért csak speciális laboratóriumokban végzik. Ez akkor is befolyásolja, ha az eredmény elérhető (általában 48 órán belül).
Ez a módszer csak egy folyamatban lévő fertőzés észlelésére képes, mert amikor a vírus már nincs a szervezetben, akkor nem tudja kimutatni. Ez a módszer nem elegendő a COVID-18-ból már felépült betegek azonosításához és nyomon követéséhez. Ha legyőzte a betegséget, egyik molekuláris módszer sem fogja megmondani. Ez bizonyos bizonytalanságot okoz, különösen, ha önként önként karanténba került, csak kisebb vagy nem egyértelmű tünetek miatt. További módszer ilyen esetben a szerológiai tesztek, amelyekről később a cikkben írunk.

Antigéntesztek

Mi az antigén?

Az emberi immunrendszer, de az összes gerinces immunrendszere is egy alapelven működik: a test minden olyan fehérje, amely nem hordozza saját génjeinek kódját, valószínűleg kórokozó, amelyet meg kell találni és meg kell semmisíteni. Amikor az immunrendszer felfedez egy idegen fehérjét, a fehérvérsejtek antitesteket termelnek, hogy megtalálják és elpusztítsák azokat. Az idegen fehérjét, amely ezt az egész reakciót kiváltja, antigénnek nevezzük, mert antitesteket (antitesteket) generál.

Hogyan működnek az antigéntesztek?

Az antigénvizsgálatok neve abból származik, hogy antigéneket keresnek, azaz j. specifikus vírusfehérjék. Az influenzateszthez hasonlóan az új koronavírus antigén-tesztjei olyan állati antitesteket használnak, amelyek "vadásznak" a vírus fehérjéire a felszínén (Spike vagy S glikoproteinek).

A garat és az orr-garat nyálkahártyájáról származó mintákat használjuk a teszthez, valamint a PCR-teszthez. Ezeket folyadékba helyezzük, hogy a vírus felszabaduljon a kapott mintákból. A folyadékot ezután az ellenanyagokat borító tesztlemez felületére viszik fel. Az antitesteket egy tesztlemezre tapasztjuk és a mintában lévő vírus fehérjéihez kötjük. Ezután további antitesteket viszünk a tesztlemezre, amelyeket kémiailag festenek, hogy láthatóak legyenek, szabad szemmel vagy fluoreszcens megvilágítás mellett. Ha a minta vírusantigéneket tartalmaz, kétféle antitest kötődik hozzájuk: az egyik a tesztlemezhez tapadja, a másik pedig láthatóvá teszi őket. Minél több vírust tartalmaz a minta, annál jobban látható a szín nyoma. Ha a minta pozitív, 15-20 percen belül színes vonalak jelennek meg a tesztlemezen.

Mit jelentenek a teszt eredményei?

  • Az alany akut COVID-19 fertőzésben szenved.

  • A tesztalany jelenleg nem fertőzött a vírussal.
  • A vírus nincs jelen a tampon gyűjtési helyén, vagy túl alacsony.
  • A betegség korai stádiumban van, vagy már megtörtént és túl késő. Ha túl korai, a vizsgálatot meg kell ismételni.

Az antigéntesztek előnyei és hátrányai

A fő előny a sebesség és a könnyű használat a PCR-vizsgálatokhoz képest, mivel az egész teszt 15-30 percet vesz igénybe, és kevés tapasztalatot igényel. A mintákat laboratóriumba nem küldik.

Pozitív teszttel diagnosztizálható a folyamatban lévő COVID-19 betegség. Ez azt jelenti, hogy ha sikeresen teljesíti ezt a tesztet, akkor garantáltan rendelkezésére áll a COVID-19. Ezenkívül ez a teszt olcsó alternatíva a molekuláris tesztekhez (RT-PCR) képest.

Másrészt az antigéntesztek csak azt tárják fel, hogy a vizsgált személy koronavírussal fertőzött-e. Az antigének nincsenek a betegség előtt vagy után, mivel ez a módszer a vírus egyes részeinek kimutatására is támaszkodik.

A molekuláris vizsgálatokhoz képest ezek a vizsgálatok kevésbé érzékenyek, mert nem szaporítják a vírusrészecskéket, mint az RT-PCR vizsgálat. Ha túl kevés antigén van a mintában, a teszt nem észleli őket, ami több hamis negatívumot jelent.

Bár ez egy bevált tesztelési technológia, a COVID-19 antigén vizsgálata még csak most kezdődik. A tesztet jelenleg a Quidel hagyja jóvá. Az antigénvizsgálatok nagyon gyors módszerek a COVID-19 fertőzés akut jelenlétének tesztelésére, és nagy potenciállal rendelkeznek. Viszont viszonylag magas arányban mutatnak hamis negatív eredményeket (akár 20% -ot). Precíziós molekuláris tesztekkel (PCR) és antitest tesztekkel kombinálva fontos szerepet játszanak a koronavírus fertőzés populációban történő elterjedéséről alkotott általános kép kialakításában.

Szerológiai tesztek (antitest tesztek)

A COVID-19 szerológiai vizsgálatainak célja a vérben a koronavírus antigénjeihez kötődő specifikus antitestek kimutatása. Ezek a tesztek meghatározzák, hogy az egyén legyőzte-e a COVID-19-et a múltban. Bárki, aki legyőzte a betegséget, vérében specifikus antitestek lesznek a kórokozóval szemben, amelynek ki volt téve. Az immunrendszer antitesteket kezd termelni a fertőzés elleni harc részeként. Az antitestek a betegség elmúltával a vérben maradnak. Ez azt jelenti, hogy az antitestvizsgálat nem tudja megállapítani, hogy a tesztelt személynek folyamatos fertőzése van-e.

Milyen antitesteket detektálnak a COVID-19 szerológiai vizsgálataival?

Az emberi test legfeljebb 5 típusú antitestet termel - immunglobulinokat, amelyek mindegyike pótolhatatlan szerepet játszik az immunrendszer működésében. A COVID-19 szerológiai vizsgálatok az IgM-re, az IgG-re, az IgA-ra és az összes antitestre összpontosítanak. Az ezen a területen folytatott kutatások azonban továbbra is folynak, és a koronavírus bizonyos specifitásokat is mutat az egyes antitestek termelésében.

  • Az IgM antitestek jelentik a szervezet első reakcióját a fertőzésre. Nem specifikusak az egyes vírusokra, képesek több antigénhez kötődni annak érdekében, hogy az elsődleges fertőzés során gyorsan eltávolítsák őket. Ezek a legnagyobbak, de az ellenanyagok teljes számának csak 10% -át teszik ki. Körülbelül a fertőzés kezdetének 7. napjától alakulnak ki.
  • Az IgG antitestek a legkisebbek és a legnagyobbak, az ellenanyagok teljes mennyiségének akár 80% -át teszik ki. Jellemzően később jelennek meg a fertőzésben az immunrendszer másodlagos reakciójaként. Mivel az adott vírusokra a legspecifikusabbak, és a leghosszabb ideig a vérben maradnak, kulcsszerepet játszanak egy adott betegséggel, tehát a COVID-19 iránti immunitásban. Később alakulnak ki, és hónapokig is eltarthatnak, amelyet jelenleg kutatnak.
  • Az IgA antitestek a nyálkahártya felületek védelmében játszanak szerepet, és megtalálhatók a vérszérumban, a váladékban, a nyálban, a könnyekben, az izzadságban és az anyatejben. A betegség kialakulásakor is kialakulnak IgM antitestekkel együtt.

Hogyan működik a szerológiai teszt?

Számos módszert alkalmaznak az új koronavírus elleni antitestek tesztelésére. Az egyik az ELISA módszer (az angol Enzyme-Linked Immunosorbent Assay-ból, amely enzimhez kapcsolt immunabszorbens tesztet jelent), amelyet szlovák laboratóriumok tesztelésére is használnak Alpha medical.

A vérmintát a laboratóriumba küldik, ahol fokozatosan összekeverik antitestekkel, antigénekkel és enzimekkel, színváltó molekulával együtt. Ha a minta pozitív a SARS-CoV-2 koronavírus elleni antitestekre, akkor ez a molekula megváltoztatja a színét. A színváltozás szabad szemmel vagy egy spektrofotométer nevű eszközzel detektálható.

Mit jelent a teszt eredménye?

  • Az antitestek jelenléte a vérben valószínűleg a COVID-19 pozitív eredményét jelzi a múltban.
  • Az antitestek jelenléte nem feltétlenül jelenti azt, hogy harcoltak volna a COVID-19 ellen; egy másik fertőzés vagy betegség miatt alakulhattak ki. Ezért a betegség megerősítéséhez figyelembe kell venni a kockázati tényezőket. Ha a vizsgált személy nem találkozott a koronavírussal, akkor nem valószínű, hogy legyőzte volna a betegséget.

  • A vizsgált személynek nincsenek antitestjei a COVID-19 ellen, ezért valószínűleg nem lesz immunizált a betegséggel szemben.
  • Mivel az antitesttermelés eltart egy ideig, ha a vérmintát a fertőzés után túl hamar vették, a negatív eredmény nem jelezheti a COVID-19 hiányát. A kockázati tényezők és a tünetek figyelembevétele után a vizsgálatot ebben az esetben meg kell ismételni.

Melyek a módszer előnyei és hátrányai?

Az ELISA egy nagyon egyszerű és olcsó laboratóriumi technológia, amelyet évek óta jól dokumentáltak és használtak az orvostudományban. Az ELISA nagyon megbízható és érzékeny módszer: a tünetek megjelenésétől számított 12 nap elteltével 100% -os érzékenységet (a pozitív eredmény pontos meghatározásának képességét) és a specifitást (a pozitív eredmény pontos meghatározásának képességét) eléri, 98% -ig. Ezért ne tévesszük össze ezt a tesztet olyan ellenanyagok egyszeri tesztjeivel, amelyek ujjbegyből származó vért használnak, alacsonyabb érzékenységgel és megbízhatósággal.

Az ELISA tesztek egyszerre több mintán (akár 96) végezhetők el, így nagyszámú beteg gyors tesztelésére használhatók.

A vett vérmintát laboratóriumba kell küldeni, ami szintén befolyásolja az eredmények elérhetőségét (általában 48 órán belül).

Ennek a módszernek az a hátránya, hogy nem tudja megbízhatóan meghatározni a folyamatban lévő COVID-19 betegséget.

Mi az antitest-tesztelés lehetősége és mikor alkalmazható?

A szerológiai tesztek elsősorban a COVID-19 legyőzésével küzdő személyek azonosítására szolgálnak. Az epidemiológiai hatóságok számára áttekintést nyújtanak a vírus és maga a betegség terjedéséről, terjedésének mértékéről, mortalitásáról és közvetett módon kollektív immunitásáról.

Fontos információ mindannyiunk számára. Ezt támasztja alá az a tény, hogy a COVID-19-ben szenvedő egyének túlnyomó többsége nem mutatja a betegség tüneteit.

Úgy gondolják, hogy mind más betegségek esetén, mind a COVID-19 betegség legyőzése után az antitestek a vérben maradnak, és így biztosítják a szervezet védelmét a visszatérő betegségekkel szemben. A kutatók szerte a világon igyekeznek választ találni olyan kérdésekre, mint például, hogy hány antitestre van szükség a koronavírus elleni immunitás biztosításához, és mennyire tarthat fenn ilyen immunitás.

A szerológiai tesztek nem használhatók a COVID-19 akut eseteinek diagnosztizálására, vagy a nem fertőzőképesség bizonyítékaként külföldre utazáskor vagy munkába való visszatéréskor. Ehhez RT-PCR teszt szükséges.
A szerológiai tesztek nagy potenciállal bírnak jövőbeni felhasználásuk során a potenciális vérplazma-donorok azonosítására, amelyek megmenthetik a COVID-19 súlyos lefolyású betegek életét. A vakcina fejlesztése során fel lehet használni a szervezet immunválaszának kimutatására.