- elemeket
- absztrakt
- A CÉL:
- az eredmények:
- következtetés:
- bevezetés
- Anyagok és metódusok
- Peptidszintézis
- A (pGlu-Gln) -CCK-8 és (Pro 3) GIP [mPEG] hosszabb távú metabolikus hatása magas zsírtartalmú egerekben
- Biokémiai elemzés
- Statisztikai analízis
- az eredmény
- A (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a peptidek kombinált adagolásának hatása a táplálékfelvételre és a testsúlyra
- A (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a kombinált peptid adagolásának hatása az ip és az orális glükóz toleranciára
- A (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a kombinált peptid beadás hatása a becsült inzulinérzékenységre
- A (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a kombinált peptid adagolásának hatása a vér lipidprofiljára
- vita
elemeket
- cukorbetegség
- Tápanyag jelzés
- Elhízottság
absztrakt
A gyomor-gátló polipeptid (GIP) receptor hatásának megsértése és a kolecisztokinin (CCK) receptorok aktiválása mechanikusan eltérő megközelítéseket képvisel az elhízással összefüggő cukorbetegség lehetséges kezelésében. Ebben a tanulmányban a (Pro3) GIP [mPEG] és (pGlu-Gln) -CCK-8 enzimatikusan stabil GIP receptor antagonistaként és a CCK receptor molekula agonistájának egyes és kombinált hatásait hasonlítottuk össze.
az eredmények:
Annak ellenére, hogy az elhízással összefüggő cukorbetegség enyhítésében egyértelmű a GIP-receptor-jelátvitel lehetősége, nincs bizonyíték a genetikai vagy kémiai GIP-receptort kiiktató állatok energiafogyasztásának csökkenésére. 3, 7 Korábbi tanulmányok megerősítették, hogy a GIP-nek nincs hatása az étkezési magatartásra9, bár több munka azt sugallja, hogy a GIP-receptorok genetikai törlése csökkentheti az ovariectomizált egerek kumulatív táplálékfelvételét. 10 Bizonyíték van a megnövekedett mozgásaktivitásra a GIP receptor 11 knockout egerekben, de hasonló megfigyeléseket végeztek a GIP-t túlzottan expresszáló transzgenikus egerekben is. Ezért úgy tűnik, hogy a közvetlen mozgásszervi hatások nem jelentik a csökkent GIP jelátvitellel rendelkező egereknél megfigyelt súlycsökkenést. Ezenkívül ellentmondásos jelentések vannak arról, hogy a GIP-receptorok szignalizációjának megsértése milyen hatással van az energiafelhasználásra. 13., 14. Így a GIP-receptor antagonizmus jótékony hatásainak további fokozásának reális megközelítése az energiafogyasztás egyidejű csökkentése lenne.
Ebben az összefüggésben korábban megkíséreltük pontosan ilyen forgatókönyv reprodukálását nagy zsírtartalmú egerekben egy specifikus és stabil GIP receptor antagonista, (Pro3) GIP és YY (3-36) peptid együttes alkalmazásával. 15 Az YY peptid-telítettség (3-36) hatását azonban nem tudtuk megfigyelni. 15 Endogén kannabinoid étvágycsökkentő rendszer kezelése az AM251 receptor antagonista (N- (piperidin-1-il) -5- (4-jód-fenil) -1- (2,4-diklór-fenil) -4-metil-1H alkalmazásával. -pirazol-3-karboxamid) csökkent táplálékfelvételt elhízott cukorbeteg (ob/ob) és magas zsírtartalmú egereknél. 16, 17 Azonban nem tudtuk bizonyítani a (Pro3) GIP kezelés szinergetikus hatását kombinálva a központi kannabinoid receptorok AM251 manipulációjával. Ezenkívül a kannabinoid receptor blokkolás klinikai alkalmazhatóságát szorosan megvizsgálták a depresszióval és szorongással kapcsolatos nemkívánatos események előfordulása miatt. Ezért egy másik útra van szükség a GIP receptor blokáddal kombinált energiafogyasztás csökkentéséhez.
A kolecisztokinin (CCK) egy bélpeptid, amelyet az endokrin I-sejtek választanak ki a tápanyagfelvételre reagálva. 19 A CCK leggyakrabban elfogadott fiziológiai szerepe az energiaegyensúly rövid távú szabályozása a jóllakottság erős stimulálásával. A CCK számos molekuláris formában létezik, hossza 58-39, 33, 22, 8 és 4 aminosav, 21, de a karboxiterminális oktapeptid, a CCK-8, jól konzervált a fajok között, és sokféle biológiai hatást megtart. A CCK a keringő szekréció után gyorsan lebomlik, rövid biológiai felezési időt eredményezve. 23 A (pGlu-Gln) -CCK-8-ot azonban a CCK-8 enzimatikusan stabil, hosszú hatású analógjaként fejlesztettük ki, jelentős telítettséggel és metabolikus hatásokkal. 24.
Ezt a tanulmányt két, ígéretes új vegyület relatív hatékonyságának és kombinált terápiás hasznosságának értékelésére tervezték az elhízással összefüggő cukorbetegség kezelésében. Naponta kétszer (pGlu-Gln) -CCK-8 vagy (Pro3 GIP) GIP [mPEG] injekciót alkalmaztunk, hosszú hatású PEGilált GIP receptor antagonistát önmagában, 25 önmagában és kombinációban nagy zsírtartalmú egerekben. krónikus testtömeg-kezelés, táplálékfelvétel, orális és intraperitoneális (ip) glükóz tolerancia, becsült inzulinérzékenység és keringő vér lipidprofilja.
Anyagok és metódusok
Peptidszintézis
A (pGlu-Gln) -CCK-8-ot az American Peptide Company-tól (Sunnyvale, Kalifornia, USA) szereztük be. (Pro3) A GIP [mPEG] -et a GL Biochem-től (Shanghai, Kína) vásároltuk. A peptideket MALDI-TOF (repülés közbeni lézeres deszorpciós ionizációs ionizáció) tömegspektrometriával jellemeztük. 26.
A (pGlu-Gln) -CCK-8 és (Pro 3) GIP [mPEG] hosszabb távú metabolikus hatása magas zsírtartalmú egerekben
Biokémiai elemzés
Az összes vérmintát (125 μl) a tudatos egerek tudatos farokvénájának kivágott végéből vettük az ábrákon látható időpontokban, és egy Beckman mikrocentrifuga (Beckman Instruments, Galway, Írország, Egyesült Királyság) segítségével 30 másodpercig 13 000-nél centrifugáltuk. g. A kapott plazmát ezután friss Eppendorf-csövekbe osztjuk, és az elemzés előtt -20 ° C-on tároljuk, A plazma glükózszintet automatizált glükóz-oxidációs eljárással analizáljuk Beckman Glucose Analyzer II (Beckman Instruments) alkalmazásával. A plazma inzulint dextránnal módosított aktív szén radioimmun vizsgálattal teszteltük. 27 A plazma lipidprofilt Hitachi Automated Analyzer 912 készülékkel mértük (Boehringer, Mannheim, Németország).
Statisztikai analízis
Az eredményeket átlag ± sem értékben fejezzük ki. Az adatokat varianciaanalízissel hasonlítottuk össze, majd egy Student - Newman - Keuls post hoc tesztet követtünk. A görbe alatti terület (AUC) elemzéseket a trapéz alakú szabály alkalmazásával, egy alap kivonással számoltuk. A görbületelemzések feletti területet hasonló módon számoltuk ki, a legmagasabb pontot használva alapként. P
Napi kétszer (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a peptidek együttes alkalmazásának ( a ) testtömeg és ( b ) táplálékfelvétel magas zsírtartalmú egerekben. A paramétereket 4 napig és a vízszintes fekete vonallal jelzett (vízszintes fekete vonallal jelölt) sóoldattal, (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 nmol/testtömeg-kg), (Pro3) GIP [mPEG] (25 nmol/testtömeg-kg) vagy mindkét peptid kombinációja. Az értékek nyolc egér esetében az átlag ± sem. * P
A (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a napi kétszeri kombinált peptidadagolás hatása az ip glükóz toleranciára és a magas zsírtartalmú egerek glükózra adott plazma inzulin válaszára. A vizsgálatokat (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 nmol/testtömeg-kilogramm), (Pro 3) GIP [mPEG] (25 nmol/testtömeg-kg) vagy mindkét peptid kombinációja után végzett kezelés után 25 napok. ( a, c ) Glükózt (18 mmol/testtömeg-kg) injektáltunk ip-ben a nyíllal jelzett időpontban éhomi egerekben. ( b, d ) Az injekció beadása után 0-60 perccel plazma glükózt és inzulin AUC-t is adnak. Az értékek nyolc egér esetében az átlag ± sem. * P AP AP P gyenge kontrollcsoport.
Teljes méretű kép
Orális glükóz beadását követően a plazma glükózszintje szignifikáns volt (P
Napi kétszer (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a peptidek kombinált adagolásának hatása a magas zsírtartalmú egerek orális glükóz toleranciájára és plazma inzulin válaszára a glükózra. A vizsgálatokat (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 nmol/testtömeg-kilogramm), (Pro 3) GIP [mPEG] (25 nmol/testtömeg-kg) vagy mindkét peptid kombinációja után végzett kezelés után 25 napig végeztük. ( a, c ) A glükózt (18 mmol/testtömeg-kg) szájon át történő szoptatással adtuk be a nyíllal jelzett időpontban éhomi egerekben egy éjszakán át. ( b, d ) Plazma glükóz és inzulin AUC 0-60 perccel az injekció beadása után is beadásra kerül. Az értékek nyolc egér esetében az átlag ± sem. ** P
A (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a kombinált peptid adagolás napi kétszeri adagolásának hatása a becsült inzulinérzékenységre magas zsírtartalmú egerekben. A vizsgálatokat (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 nmol/testtömeg-kilogramm), (Pro 3) GIP [mPEG] (25 nmol/testtömeg-kg) vagy mindkét peptid kombinációja után végzett kezelés után 25 napig végeztük. ( a ) Inzulint (20 NE/testtömeg-kg) injektáltunk ip-ben a nyíllal jelzett időpontban az éheztetett egerekben. b ) A görbe értékek fölötti plazma glükózterület az injekció beadása után 0-60 percig szintén bemutatásra kerül, amelyet az egyes kezelési sémák teljes hatásának számszerűsítéséhez a sóoldattal kezelt kiindulási kivonási csoport plazma glükózszintjének nulladik időpontjában számítottak ki. ± itt nyolc egér. ** P
Napi kétszer (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] és a peptidek kombinált adagolásának hatása a magas zsírtartalmú egerek vér lipidprofiljára. ( a - d ) A paramétereket 34 napos, napi kétszeri sóoldattal (pGlu-Gln) -CCK-8 (25 nmol/testtömeg-kg), (Pro3) GIP [mPEG] (25 nmol/testtömeg-kg) vagy mindkét peptid. Az értékek nyolc egér esetében az átlag ± sem. ** P AP AP P gyenge kontrollcsoport.
Teljes méretű kép
vita
A változatlan inzulinszint ellenére javuló glükóztoleranciával összhangban az (pGlu-Gln) -CCK-8, (Pro3) GIP [mPEG] vagy mindkét peptid kombinációjával végzett kezelés alacsonyabb glükózkoncentrációval társult az inzulinérzékenységi vizsgálatok során. Az additív terápiás hatás hiánya ebben az esetben valószínűleg annak az oka, hogy a közelgő hipoglikémiában alapvető antiregulációs mechanizmusok indukálódnak, mivel az inzulininjekció után a glükózszint 3-ra csökkent. Ezenkívül a bizonyítékok arra utalnak, hogy a CCK az inzulinérzékenység fontos szabályozója magas zsírtartalmú etetés során. Ez azt is jelentené, hogy az egyes kezelési sémáknál megfigyelt jótékony hatások a glükóz homeosztázisra a csökkent zsírtartalom és az ennek következtében megnövekedett inzulinhatás közvetlen következményei. 34 Tekintettel a súlycsökkenéssel kapcsolatos hasonlóságokra, ez hihető magyarázatnak tűnik.
Összefoglalva, ez a tanulmány azt sugallja, hogy a (pGlu-Gln) -CCK-8 vagy (Pro3) GIP [mPEG] napi kétszeri injektálása hatékony eszköz a magas zsírtartalmú egerek metabolikus kontrolljának javítására. Ez összhangban áll azzal a nézettel, hogy mindkét vegyület érdekes és izgalmas új megközelítést jelent az elhízással összefüggő cukorbetegség kezelésében. A (pGlu-Gln) -CCK-8 és (Pro3) GIP [mPEG] additív hatásának hiánya további tanulmányokat igényel, de azt sugallja, hogy a CCK receptorok együttes aktiválása és a GIP receptor hatásának gátlása nem releváns a elhízással társuló cukorbetegség.