A SEJT ENDOKRINOLÓGIA LABORATÓRIUMA (LBE)

kísérleti

1. A laboratórium tudományos fókusza.

Az elmúlt tíz év kutatási területe a következőkre összpontosított:

a) felismerjük az EGF-receptor transzmembrán szegmensének szerepét az EGF-receptor intracelluláris sejtproliferációs útvonalainak aktiválásában;

b) a hormon által szabályozott zsírszövet-anyagcsere változásainak tisztázása patkányokban pszichotrop anyagok hatására;

c/az endokrin rendszer hatásának felderítése a rheumatoid arthritis kialakulásában és lefolyásában emberben és az adjuváns arthritis állatokban;

d/ösztrogén aktivitású endokrin rendellenességek sejtnövekedésre és szaporodásra gyakorolt ​​hatásának molekuláris és sejtes folyamatainak vizsgálata, valamint petefészek granulosa sejtekben a szteroidogenezis folyamatai.

2. Kiválasztott eredmények

a/Az EGF receptor transzmembrán (TM) glikoprotein monomer. A ligandumkötés megindítja a receptor dimerizációját és az intracelluláris domén tirozin kináz aktiválását/foszforilációját. A foszforilációs-defoszforilezési reakciók jelátviteli útja a normál sejtek proliferációjának, differenciálódásának, migrációjának és metabolizmusának indukcióját eredményezi. A tirozin-kináz aktivitású receptorok túlzott expressziója az emberi rák számos formájában jelen van. Eredményeink azt mutatták, hogy a TM domének közötti kölcsönhatások az EGF receptor dimerizációjának/aktiválásának aktív részei. A receptor dimerizációnak a TM kölcsönhatások befolyásolásával való gátlásának vélelmét megerősítették: i) a szintetikus EGFr-TM emberi emlődaganatsejtek membránjába történő beépítése után in vitro, ii) e sejtek TM-et kódoló plazmid-DNS-sel történő transzfektálásával. Specifikus gátló hatást mutattak ki az intracelluláris jelátviteli út fehérjék receptor foszforilációjának és foszforilációjának csökkentésében (1. kiválasztott pullikációk).

c/Az ízületek szinoviális folyadékának hormonszintje lokálisan befolyásolhatja a szinoviális és az immunsejteket, és a citokintermelés szabályozásával modulálhatja a reumás gyulladás menetét. A rheumatoid arthritisben szenvedő betegeknél a térd szinoviális folyadékának hormonszintjeinek összehasonlítása és az osteoarthritisben nem gyulladásos váladékot mutató betegek csoportja azt mutatta, hogy a gyulladáscsökkentő ösztrogének szintje az ízületi folyadékban megemelkedik. a betegek. A tesztoszteron szint szintén kismértékben emelkedett, de az ösztradiol/tesztoszteron arány szignifikánsan magasabb volt a reumatikus betegeknél. Ezenkívül a progeszteron, az aldoszteron és a növekedési hormon emelkedett szintjét találták a szinoviális folyadékban, amelyek szintén hozzájárulnak az autoimmun gyulladás aktiválásához. Az inzulin, a növekedési hormon, a C-peptid és a prolaktin jelenlétét az ízületi folyadékban is kimutatták (válogatott publikációk 2,3).

d/Az endokrin rendellenességek olyan anyagok, amelyek elsődleges hatása az endokrin homeosztázis befolyásolása a receptorok által közvetített hatások, a hormonok szintézise vagy metabolizmusa révén. Az egyik alcsoport a xenoösztrogének, amelyek a sejtszaporodás (karcinogenezis) és a szteroidogenezis szempontjából befolyásolják a természetes ösztrogének hatását. Ide tartoznak a lágyítószerként, detergensként és peszticidként használt fenol- és ftalát-származékok, amelyek a környezetszennyezés révén jutnak az emberi és állati testbe, és az élelmiszerláncba kerülnek. A leggyakoribb xenoösztrogén a biszfenol A (BPA), amely nagy dózisokban gátolta a sertés oocita-kumuláris komplexek terjeszkedését, a nukleáris petesejtek érését, blokkolta a meiózis összeépülését és csökkentette az FSH által stimulált ösztradiol termelést a granulosa sejtekben. Egy másik eredeti eredmény a progeszteron bazális és stimulált termelésének fenolok általi gátlásának megállapítása a cAMP-jelátviteli út és a szteroidogenezis enzimek modulációjának mechanizmusával. A szomatikus és ivarsejtekben zajló folyamatok negatív hatásai a xenoösztrogének által hozzájárulhatnak a reproduktív problémákhoz és a reproduktív szervek rosszindulatú megbetegedéseinek előfordulásának növekedéséhez (4,6,8,9,10).

3. A laboratóriumban alkalmazott módszertani eljárások

In vitro vizsgálatok sejtvonalakon:

a) MCF7 - emberi tapadó mellráksejtek, amelyek túlzott mennyiségben

expresszálják az alfa-ösztrogén-receptort;

b) LNCaP adherens androgénérzékeny humán prosztata adrenokarcinóma sejtek,

amelyek specifikus androgén receptorokat expresszálnak a citoszolban és a magfrakciókban:

i) a sejtproliferáció és a de novo DNS-szintézis mérése;

ii) a proliferációs mechanizmusban szerepet játszó fehérjék és gének expressziójának mérése

iii) az anti-apoptotikus hatásmechanizmus fehérjék és gének expressziójának mérése;

c) In vitro vizsgálatok primer sejttenyészetekben - sertés petefészek

i) a szteroidogenezis enzimek aktivitásának mérése;

(ii) a másodlagos jelzőkülnökök gyártásának meghatározása.

4. Aktuális tudományos-kutatási tevékenységek, a laboratóriumban megoldott aktuális projektek

VEGA 2/0107/10, 2010-2012: Az antiapoptosis részvétele az ipari xenoösztrogének karcinogenezissel kapcsolatos proliferatív hatásainak mechanizmusában.

A projekt a fenol típusú xenoösztrogének proliferatív hatásainak mechanizmusának részletesebb specifikációjára összpontosít az anti-apoptotikus hatás szempontjából. Ezenkívül a projekt célja ezen ipari anyagok természetes hormonral, az ösztradiollal kombinált hatásainak tisztázása a sejtek növekedésére gyakorolt ​​szinergikus vagy additív hatás szempontjából.

APVV-0147-10, 2011-2014. A kiválasztott endokrin rendellenességek hatásának tisztázása növeli az emlő, prosztata és petefészek daganatok kialakulásának kockázatát.

A projekt célja a kiválasztott endokrin rendszert károsító szerek és természetes hormonokkal alkotott keverékeik hatásmechanizmusának in vitro vizsgálata:

- az emberi emlőrák és az emberi prosztatarák sejtjeinek szaporodása - genomiális és nem genomikus hatásmechanizmusok;

- szteroidogenezis folyamatai petefészek granulosa sejtekben, nem genomiális hatások azonosítása intrafollikuláris folyamatokban (intracelluláris jelátviteli utak meghatározása).

5. A megítélt külföldi támogatások listája

1/EK, Brüsszel/CNRS Franciaország: Az adipocita szerkezetének és működésének módosítása diétás halolajjal, CIPA-CT-92-0162, 1993;

2/INSERM, Franciaország: Az n-3 típusú zsírsavak hatása az adipocita érzékenységére, Cooperation Est/Ouest 1994, 02/1994-12/1995;

3/INSERM, Franciaország: A tirozin-kináz receptorok transzmembrán szegmensének szerepe: tanulmány egyes sejteken, 4E010B, 01/1996-12/1997;

4/EK, Brusel: 5 RP EK - Az endogén szteroid anyagcsere diszregulációja potenciálisan megváltoztatja az ideg- és reproduktív rendszer fejlődését: A környezeti lágyítók hatása, QLRT - 2004 -02637, 01/2003-06/2006;

5/ŠTEFÁNIK, kétoldalú szlovák-francia projekt az INSERM U575 partnerirodával Strasbourgban: Transmembrane interactions in cellular signaling. 2006-2007.

6. Nemzetközi együttműködés

Dr. R. H. Waring, Biológiai Tudományok Iskolája, Birminghami Egyetem, Birmingham, Egyesült Királyság

Dr. D. Bagnard és dr. G. Cremel, INSERM U575, Strasbourg, Franciaország

Dr. O. Puig, Inst. Biotechnológiai Egyetem, Helsinki Egyetem, Finnország

Dr. Amar Bennasroune, kölcsönhatások laboratóriuma, ökotoxikológia, biológiai sokféleség, ökoszisztémák, CNRS UMR 7146 Metz

Dr. Pierre Hubert, LISM, CNRS UPR 9027, Marseille, Franciaország

7. A Sejtendokrinológiai Laboratórium munkatársainak legfontosabb publikációinak kiválasztása (IF ≥2).

1. Bennasroune A., Fickova M., Gardin A., Dirrig-Grosch S., Aunis D., Cremel G., Hubert P.: Transzmembrán peptidek, mint az ErbB receptor szignalizáció inhibitorai. Mol Biol Cell. 2004. július; 15 (7): 3464-74. IF = 7,454

2. Imrich R., Rovensky J., Zlnay M., Radikova Z., Macho L., Vigas M., Koska J.: Hypothalamicus pituritary mellékvese tengely működése ankylosis spondylitisben. Ann. Nyálka. Dis., 63, 671-674, 2004, IF 3916

3. Mlynarcikova A., Fickova M., Scsukova S.: A kiválasztott fenol- és ftalát-származékok hatása a tenyésztett sertés granulosa sejtek szteroid hormontermelésére. Altern Lab Anim. 2007 márc. 35 (1): 71-7, IF 3, 203

4. Mlynarcikova A., Kolena J., Fickova M., Scsukova S.: A sertés petefészek granulosa sejtjeinek szteroid hormontermelésében bekövetkező változások, a biszfenol A és a biszfenol A dimetakrilát hatására. Mol Cell Endocrinol. 2005. október 10 .; 244 (1-2): 57-62, IF = 2,786

5. Mlynarcíková A., Nagyová E., Fickova M., Scsukova S.: A kiválasztott endokrin rendellenességek hatása a meiotikus érésre, a gomoly tágulására, a hialuronán és a progeszteron szintézisére sertés oocita-gomoly komplexekkel. Toxicol In Vitro. 2009. ápr .; 23 (3): 371-7. IF = 2,473

6. Nagyova E., Camaioni A., Scsukova S., Mlynarcikova A., Prochazka R., Nemcova L., Salustri A.: A kumulus sejtek SMAD2/3 aktiválása és az epidermális növekedési faktor receptor útvonalak részt vesznek a sertés oocita-gomoly sejtjeinek tágulásában és szteroidogenezisében. Mol Reprod Dev. 2011, 78 (6): 391-402. IF = 2,395