A fehérje szialiláció változásai a prosztatarákban (kísérleti tanulmány eredményei)

Absztrakt:

Bevezetés:

fehérje

A prosztatarák a férfiak egyik leggyakoribb formája, még a fejlett országokban is egyre gyakoribb. A rendelkezésre álló diagnózis és kezelés ellenére ez a harmadik leggyakoribb oka a rákos halálnak a férfiaknál. A prosztata-specifikus antigén szérumszintjének értékelése kulcsfontosságú szerepet játszik a diagnózisban, de a teszt alacsony érzékenységgel és specifitással rendelkezik. Jelenleg nincs megbízható, nem invazív módszer, és a prosztatarák diagnózisát meg kell erősíteni biopsziával. A sejtszerkezetek rendellenes glikozilezése fontos része a tumor transzformációjának. A bemutatott vizsgálat célja a glikoziláció változásainak felmérése volt a prosztata szövet tumor transzformációja során

Módszertan:
24 prosztata betegség esetét elemeztük, köztük jóindulatú prosztata hiperplázia és prosztata adenokarcinóma esetét, eltérő Gleason pontszámokkal; 3 + 4, 4 + 4 és 4 + 5. Lektin hisztokémiát sziálsav-specifikus lektinek, Maackia amurensis leucoagglutinin (MAL) α-2,3 kötődéséhez és Sambucus nigra leukooagglutinint (SNA) felhasználva a glikozilációs változások értékeléséhez. ) az α-2,6 kötéshez. A változásokat félkvantitatív módon, majd morfometriai analízissel értékeltük.

Az eredmények:
A prosztata szövetében a tumor transzformációja összefügg a sejtstruktúrák glikozilációjának változásával. A prosztata tumor transzformációjával kapcsolatban a sejtes glikokonjugátumok szialilációjának jelentős csökkenését figyeltük meg, mind az α-2,6, mind az α-2,3 kötésben. Ez a csökkenés kifejezettebb volt a magasabb Gleason pontszámmal rendelkező adenokarcinómák esetében.

Következtetés:
A glikoziláció változásai befolyásolhatják a tumorsejtek funkcionális tulajdonságait, beleértve a túlélést, az invazivitást és az áttétes potenciált. A sziálsav expressziójának értékelése a prosztata szövetében fontos lehet a prosztata daganatok diagnosztizálásában, valamint rosszindulatú potenciáljuk jobb megértése érdekében.

Kulcsszavak:
prosztata adenokarcinóma, sziilsav, glikokonjugátumok, lektinek, neuraminidázok, szialiltranszferázok,
prognosztikai markerek

* A cikk részét képező összes táblázat, grafikon és ábra a tanulmány végén található csatolt PDF fájlban található.

Bevezetés

A prosztatarák a férfiak egyik leggyakoribb rákformája. A statisztikák évente több mint egymillió új esetről számolnak be világszerte. Szlovákiában a prosztatarák előfordulása a férfiaknál csak a vastagbélrák mögött áll, és növekvő tendenciát mutat. 2000 és 2010 között előfordulása csaknem megduplázódott (Kép 1). A rendelkezésre álló diagnózis és kezelés ellenére ez a harmadik fő oka a rákos halálnak a férfiaknál (1).

A PSA vizsgálat rossz prediktív értéke a prosztata betegség változásainak túlzott diagnosztizálásához vezetett (4). Folyamatban lévő tanulmányok, köztük a prosztatarák szűrésének európai randomizált vizsgálata (ERSPC) alapján az Európai Urológiai Szövetség eredetileg úgy találta, hogy a prosztatarák széles körű szűrésének feltételei a teljes populációban nem teljesülnek egyértelműen, és csak a betegek ajánlását javasolta. előzetes megfelelő kockázati utasítás után (5.6.). A betegség növekvő előfordulása miatt jelenleg széles körű vita folyik a népesség egészére kiterjedő prosztatarák szűrés szükségességéről. Ezért fontos olyan új diagnosztikai eljárásokat és markereket keresni, amelyek felhasználhatók a diagnosztikában. Az Európai Urológiai Társaság felhívta az Európai Bizottságot, hogy fokozza támogatását és finanszírozását ehhez a kutatáshoz.

Új diagnózis lehet a sziálsav. A sziálsav olyan monoszacharid, amely a sejtfelszínen lévő glikoproteinek terminális részein a szialilezés folyamatában fejeződik ki. A sziálsavak megtalálhatók a Naj O-hez kötött glikánokon, amelyek gyakran a bázikus galaktóz-maradékhoz kapcsolódnak, leggyakrabban egy α-2,6 vagy α-2,3 glikozid-kötésen keresztül (7). Ez a monoszacharid fontos a sejt-sejt kölcsönhatásokban, valamint a sejtek és a környező mikrokörnyezet között. Döntő szerepe van a glikoprotein szerkezet stabilizálásában és a sejtfelszín jellemzőinek meghatározásában (8,9).

A megváltozott szialilezés gyakran kíséri a rosszindulatú transzformációt, hozzájárulva a tumor fokozott agresszivitásához és növekedéséhez. A daganatsejtek olyan új tulajdonságokra tesznek szert, amelyek lehetővé teszik számukra a szervezet immunrendszeréből való kilépést, befolyásolják a környező szövetek behatolásának és áttétképző képességét. Számos daganat esetében kimutatták, hogy a fehérje szialilációjának változása összefügg a tumor biológiai viselkedésével és a beteg prognózisával. A szialiláció hatással van az apoptózisra (10), a neovaszkularizációra (11) a tumorban, és hatással van a kemoterápiával és sugárterápiával szembeni rezisztenciára (12,13). A sziálsavszint változása a betegek szérumában is kimutatható. Jóindulatú elváltozásokban és rosszindulatú daganatokban szenvedő betegeknél különbséget találtak a sziálsavszintekben (9).

A szialilezés értékelése tehát érdekes prognosztikai vagy diagnosztikai markert jelenthet a folyékony biopsziában való lehetséges felhasználása szempontjából. A jelen tanulmány célja tehát a glikokonjugátumok szialilezésében bekövetkezett változások értékelése volt a prosztata szövetben a tumor transzformációjával kapcsolatban.

Módszertan

A vizsgálat alapja a prosztataszövet formalinnal rögzített és paraffinba ágyazott prosztata szövetének archív mikroszkópos készítménye volt, a Károly Egyetem Orvostudományi Karának Kóros Anatómiai Intézetének forrásaiból. A megállapított kóros diagnózisok szerint összesen 24 mintát választottunk ki. Összpontosítottunk nem tumoros prosztata elváltozásokra (6 beteg), prosztata adenokarcinómára, különböző Gleason pontszámokkal; 3 + 4 (6 beteg), 4 + 4 (6 beteg) és 4 + 5 (6 beteg).

Többször is hisztopatológiai szempontból értékeltük őket a WHO közzétett kritériumai szerint. Két párhuzamos metszetet készítettünk a kiválasztott tárgylemezekből, és hisztokémiailag kétféle lektinnel festettük őket. Az α-2,6 kötődésre specifikus agglutininSambucus nigra (SNA) és a sziálsav α-2,3 kötésére specifikus Maackia amurensis (MAL) leukoagglutinin. A viaszmentesített készítményeket 5 percig PBS-ben öblítettük (foszfáttal pufferolt sóoldatban, 0,5% BSA-val, 0,05% NaN3 0,005% Tween-rel, pH 7,2). A tárgylemezeket 90 percig inkubáltuk oldatban/ml biotinilezett SNA és MAL (Vector, Carpinteria, CA) szobahőmérsékleten. Miután háromszor öblítettük PBS-ben, a tárgylemezeket 30 percig streptavidin-peroxidáz-komplexszel inkubáltuk, és ismételt öblítés után egy percig diaminobenzidin-oldattal festettük. Ezután a tárgylemezeket hematoxilinnel festettük.

A készítményeket fénymikroszkóppal értékeltük, az értékelt marker citoplazmatikus és luminalis membrán pozitivitásának felmérésére összpontosítottunk. Kiértékeltük a készítmény teljes területét, meghatároztuk a Gleason-pontszámot minden értékelt mezőre, majd minden mezőt külön-külön értékeltünk. A megállapításokat szemikvantitatív módon, szemikvantitatív pontszám alkalmazásával fejeztük ki az alábbiak szerint:

  • negativitás 0,5 gyenge, ill. szabálytalan pozitivitás
  • jól értékelhető rendszeres pozitivitás
  • erős rendszeres pozitivitás
  • nagyon erős rendszeres pozitivitás

A következő lépésben a ImageJ, v hisztomorfometrikus szoftver segítségével számszerűsítettük a pozitivitás intenzitását. 1,52p (14,15) és DAB intenzitási pontszámként (SDI) kifejezve, ahol 0 a minimális elméleti intenzitás, 1 a maximális elméleti intenzitás. A szemikvantitatív DAB pozitivitási pontszámot (SDP) az egyes értékelések átlagaként fejezzük ki ± SEM. Az eredményeket statisztikailag értékeltük a Graph Pad Prism statisztikai szoftver segítségével, a Kruskal-Wallis nemparametrikus teszt, p értékek felhasználásával. Weboldalunk sütiket használ. Például a webhely forgalmának elemzésére vagy anonim statisztikák révén a webhely további fejlesztésére és a hirdetések személyre szabására szolgálnak.
A weboldal böngészésével elfogadja a személyes adatok védelmének és a sütik használatának elveit. Egyetértek adatvédelmi irányelvekkel