• P. Krenek, A. Gazova, D. Kucerova, I. Kankova, M. Horvathova, J. Klimas, P. Ochodnicky, J. Kyselovic
  • Az enalapril rövid távú alkalmazásának hatása a bal kamrai tömegre és az endotheliális NO szintáz expressziójára normotenzív patkányokban
  • Farm Obz, 79, 2010, 8, p. 228-234

Az endoteliális NO-szintáz (eNOS) védő szerepet játszhat a szívben és az erekben. Számos tanulmány arról számolt be, hogy az ACE-gátlók (ACEI) beadása után fokozódik a szív és az erek expressziója, miközben a szív- és érrendszeri betegségek modelljeiben korrigálják a szív- és érrendszeri károsodásokat. Az ACE-gátlók egészséges patkányokban gyakorolt ​​hatásait kevésbé vizsgálják, bár ezek a vizsgálatok segítenek tisztázni, hogy az eNOS-expresszió növekedése a gyógyszer elsődleges hatása, vagy csupán a patológiás állapot korrekciójával jár-e együtt. Ennek a vizsgálatnak a célja az enalapril bal kamrai tömegre gyakorolt ​​hatásának, valamint az eNOS és negatív alloszterikus modulátorának, a caveolin-1 (cav-1) expressziójának értékelése volt normotenzív patkányok szívében és aortájában, anélkül, hogy károsodnának. Olyan Wistar patkányokat használtunk, amelyeknek az enalaprilt (5 vagy 15 mg/kg/nap - E5, E15) két hétig adtuk, két részre osztva, szájon át történő szoptatással. Kontroll patkányok (K) vivőanyagot kaptak. A szisztolés vérnyomást farok-mandzsetta módszerrel mértük. Feláldozás után Western blot segítségével értékeltük a biometrikus paramétereket és az eNOS expressziót a bal kamrában és az aortában. Az enalapril nem volt hatással a pulzusra, és csak kis mértékben csökkentette a vérnyomást nagy dózisokban. A bal kamra abszolút és relatív súlyát mindkét enalapril adag csökkentette (P

beadása

A nitrogén-monoxid (NO) az egyik fontos szabályozó mechanizmus (mediátor) a szív- és érrendszerben. Szerepe van az érrendszeri tónus és a vérnyomás szabályozásában, gátolja a vérlemezkék aggregációját. Olyan védőhatásai vannak, amelyek nem feltétlenül kapcsolódnak a vérnyomás csökkenéséhez, Az NO hatásainak nagy része a citoszolos guanilil-cikláz által szintetizált cGMP-nek tulajdonítható, amelyet a NO aktivál. Az NO néhány hatása a fehérjék nitrozilezésével is összefügg. Az NO csökkenti a sejtek légzését azáltal, hogy hat a légzési láncra, ami fiziológiás NO-szinteken hozzájárulhat a szívizom védőhatásaihoz (1).

A nitrogén-oxidot a NO-szintáz három izoformája szintetizálja a szervezetben, amelyek katalizálják az L-arginin átalakulását L-citrullinná NO -vá. A NOS II (iNOS) indukálható, expressziója sok sejttípusban jelentősen megnő a citokinekkel és bakteriális endotoxinokkal történő kezelés után (2). Két izoforma konstitutív - a NOS I (neuronális, nNOS) és a NOS III (endoteliális, eNOS). Kifejezésük azonban nem állandó, és számos szabályozási mechanizmusnak van alávetve (3). Az NNOS expressziója nem korlátozódik az idegsejtekre. Kifejeződik vázizomban, makula densa-ban és szívizomsejtekben, valamint bizonyos körülmények között vaszkuláris simaizomokban. Az eNOS elsősorban az endothel sejtekben található meg, de a szív myocytáiban is. Az INOS aktivitása viszonylag független a kalciumtól, és az enzim folyamatosan nagy mennyiségű NO-t termel, ami mérgező lehet (4). Ezzel szemben a konstitutív izoformák aktivitása bazális körülmények között alacsony, jelentősen és átmenetileg növekszik a citoszolos kalcium növekedésével (5).

Az ACR-gátlás hatása az SHR patkányokban védő, amit az a tény is bizonyít, hogy az ACE gátlás (valamint az AT1 blokád) megduplázza az SHR patkányok élettartamát. A ramipril öreg SHR patkányokban növelte az eNOS fehérje szintjét a szívizom bal kamrájában, és javította az endothelium-függő aorta relaxációt (15).

Az eNOS expresszió normalizálódását az ACE gátlása után megfigyelték kísérleti szívelégtelenségben (16, 17), pulmonalis hipertóniában (18) és iszkémiás szívbetegségben szenvedő betegeknél is (19). Nem világos azonban, hogy az eNOS-expresszió növekedése az elsődleges hatás, amely elősegíti a kóros állapot javulását, vagy ez egyidejűleg járó jelenség, vagy az összes ACE-gátló rendelkezik-e ezzel a tulajdonsággal. Ezért úgy döntöttünk, hogy értékeljük az enalapril hatását az eNOS és alloszterikus modulátorának cav-1 expressziójára normotenzív patkányokban, amelyeknek nincs kardiovaszkuláris károsodásuk, és így kizárható, hogy az ACE-gátlók eNOS-expresszióra gyakorolt ​​lehetséges hatásai függetlenek lesznek a kóros elváltozások korrekciója.

A Wistar patkányokat (18 hetes korban) normál körülmények között helyezték el, és "ad libitum" vizet és ételt kaptak. Az enalapril-hidrokloridot (a Zentiva ajándéka) (5 mg/kg/nap vagy 15 mg/kg/nap) orális szondával adták egy héten át, 12 óránként két részre osztva. A kontroll állatok vivőanyagot kaptak (0,5% metil-cellulóz nyálka). A szisztolés vérnyomást és a pulzusszámot farok-mandzsetta módszerrel mértük 3 órával és 10 órával a reggeli adag után. CO2-vel töltöttük a patkányokat. Megmértük a kamrákat, megtisztítottuk az aortát és a fagyasztott szövetmintákat folyékony nitrogénben, és -20 ° C-on tároltuk a feldolgozásig.

Kiértékeltük az eNOS és a cav-1 expressziót Western blot analízissel kemilumineszcens detektálással (ECL Plus, Amersham), és összehasonlítottuk az aktin expresszióval. Előzetes kísérletek során igazoltuk, hogy az eNOS, a cav-1 és az aktin elleni antitestek a várt molekulatömeg egyetlen sávját mutatták ki, és hogy az aktin expresszióját az enalapril nem változtatta meg. Felkutattuk az eNOS, a cav-1 és az aktin autoluminogramjait, és denzitometriásan értékeltük. Kiértékeltük a cav-1 és az aktin foltok optikai sűrűségét, és ebből a sűrűségből kivontuk a háttér sűrűségét. Kiszámítottuk a cav-1/aktin arányt, amelyet normalizáltunk úgy, hogy a kontroll patkányok expressziója egyenlő volt, azaz 100%.

Az eredményeket átlag ± átlag hibaként jelentjük. Összehasonlítottuk a csoportokat a nem párosított Student t-teszt segítségével.

Az enalapril nem volt hatással a pulzusra vagy a vérnyomásra, kivéve egy nagyobb dózist, amely 10 óra elteltével csökkentette a nyomást (1. ábra). Az enalapril nem változtatta meg a testsúlyt, de az adagtól függetlenül szignifikánsan csökkentette az abszolút és a relatív bal kamrai súlyt is (2. ábra). Az aorta súlya enyhén csökkent az enalapril nagyobb adagjai után. Az eNOS fehérjeszinten történő expresszióját az enalapril nem változtatta meg a bal kamrában (3. ábra) és az aortában sem, de észrevehető tendencia mutatkozott a fokozott expresszió felé (4. ábra). A Cav-1 expresszió mindkét szövetben hasonló mintázatú volt (3. és 4. ábra).

Az enalapril rövid, 7 napos alkalmazás után dózisfüggetlen módon csökkentette a bal kamrai tömeget normotenzív patkányokban, a vérnyomásra nem gyakorolt ​​jelentős hatást, és az enalapril sem a bal kamrában, sem az aortában nem növelte az eNOS expressziót.

Így az eNOS magasabb expressziója, de más mechanizmusok, nem járultak hozzá a bal kamrai tömeg csökkenéséhez. Pechanova és mtsai. (20) megállapította, hogy a kaptopril és az enalapril nem változtatta meg az eNOS expresszióját, de spontán hipertóniás patkányokban fokozta aktivitását a szívben és az aortában. Ez az aktivitásnövekedés annak tudható be, hogy az ACE gátlása után a bradykinin szint emelkedik. A bal kamrai tömeg csökkenését valószínűleg nem a normotenzív patkányok vérnyomásának csökkenése okozta vizsgálatunk során, mivel az enalapril csak minimális hatását figyeltük meg a nagy dózisú vérnyomásra, és a bal kamra tömege ugyanolyan mértékben csökkent alacsonyabb ACE inhibitor dózisok esetén . Lehetséges, hogy a bal kamra tömegének gyors csökkenése az angiotenzin II szint csökkenésének volt köszönhető, amely az enalapril beadása után várható volt. A növekedési faktorok expressziójának változásáról, amelyről beszámoltak, hogy összefügg az angiotenzin II-vel, a korábbi vizsgálatok nem számoltak be (21).

Megnövekedett eNOS-expressziót figyeltek meg az ACE-gátlók beadása után számos szív- és érrendszeri betegségben, például spontán hipertóniás patkányok bal kamrájában (15), deoxikortikoszteron-acetáttal és sóoldatos diétás hipertóniával (22) rendelkező patkányokban a pulmonalis hipertónia okozta monoterápiával: koszorúér-betegségben (23), kísérleti szívelégtelenségben (16, 17), valamint ebben a betegségben szenvedő betegeknél (19). Alsó végtag iszkémiában szenvedő egereknél proangiogén hatást és fokozott eNOS expressziót jelentettek ACE gátlás után. Ezt a hatást a bradikinin közvetítette a B2 receptorokon keresztül (24).

Számos tanulmány értékelte az ACE-gátlók normotenzív egyének eNOS expressziójára gyakorolt ​​hatását a szív- és érrendszer károsodása nélkül. A ramipril fokozta az eNOS expresszióját a normotenzív patkányok aortájában (25). A terápia időtartama ebben a kísérletben 5 hét volt, ami kísérletünkben lényegesen hosszabb, mint 7 nap. Bachetti és mtsai. (26) az eNOS expresszió növekedését állapította meg a quinaprillal kezelt normotenzív patkányok aortájában. A szerzők feltételezik, hogy a bradikinin és a B2 receptor aktivációjának növekedése kulcsszerepet játszott, mivel a bradikinin B2 receptor antagonista icatibant blokkolta az eNOS növekedését. Vizsgálatunkban az enalapril eNOS expresszióra gyakorolt ​​hatásának hiánya annak is köszönhető, hogy nem minden ACEI egyenértékű a NO útvonal-modulációban (27).

A szerzők a normotenzív patkányok perindoprillal történő kezelése után figyelték meg a legjelentősebb hatást az eNOS expressziójára, az eNOS expressziót az enalapril szignifikánsan megnövelte, de a vérnyomásra gyakorolt ​​hasonló hatás ellenére kisebb mértékben, mint a perindopril. Ebben a vizsgálatban azonban magasabb dózisú enalaprilt (20 mg/kg/nap) alkalmaztak, mint vizsgálatunkban. Számos kísérlet azt mutatja, hogy legalább néhány ACE-gátló képes növelni az eNOS expressziót in vitro. A zofenoprilát növelte a fibroblaszt-növekedési faktor-2 és az eNOS expresszióját az endoteliális sejttenyészetekben (28), valamint a sertés koszorúerek szerves kultúráiból pseudokapillárisok képződését. Az enalapril kevésbé volt hatékony ebben a tekintetben - míg a zofenoprilát 17-szeresére növelte az eNOS-expressziót az endothelsejtekben, az enalapril csak 1,5-szeres növekedést váltott ki (29).

Összegzésképpen elmondható, hogy a bal kamrai tömeg gyors csökkenése az enalapril normotenzív patkányoknak való 7 napos beadása után nem a vérnyomás csökkenésének, az eNOS vagy a caveolin-1 expresszió növekedésének volt köszönhető. Az enalapril eNOS-expresszióra gyakorolt ​​hatásának hiánya reprodukálható volt, de az ACE-gátló beadására vonatkozó irodalmi adatok alapján váratlan. Lehetséges, hogy az eNOS expressziójának növekedése az egyik olyan hatás, amelyet nem minden ACE-gátló okoz, vagy csak hosszan tartó alkalmazás után fog nyilvánvalóvá válni. A vizsgálat bizonyos korlátja, hogy adataink alapján nem zárható ki az eNOS szerepe a bal kamrai tömeg csökkentésében, mivel csak az eNOS kifejeződését mértük, de aktivitását nem.

Köszönöm
Ezt a munkát 1/0357/09, 1/0377/09, 1/0707/09 támogatások támogatták.

Irodalom

P. Krenek, A. Gazova, D. Kucerova, I. Kankova, M. Horvathova, J. Klimas, P. Ochodnický, J. Kyselovič
Gyógyszerésztudományi Kar, Comenius Egyetem, Farmakológiai és Toxikológiai Tanszék, Pozsony
Orvosi Kar, Comenius Egyetem, Farmakológiai és Klinikai Farmakológiai Tanszék, Pozsony

P. Krenek, A. Gazova, D. Kucerova, I. Kankova, M. Horvathova, J. Klimas, P. Ochodnicky, J. Kyselovic