elemeket

absztrakt

az eredmény

Növekedési teljesítmény és testösszetétel

Az egyes csoportok patkányainak kezdeti testtömege hasonló volt (1. ábra). A kísérletünkben kontrollként szolgáló kazeincsoporthoz képest az étrendi szójafehérjével táplált csoport jelentősen csökkentette a napi takarmányfelvételt (9% -os csökkenés, P 0,05). A szója- és húsfehérjék testzsírosságra gyakorolt ​​hatásának értékeléséhez mértük az epididymális zsírszövet tömegét és a máj lipidtartalmát (2. ábra). Csak a szójafehérje csökkentette az epididymális zsírszövet súlyát (P.

étrendi

( A ) testsúly; ( B ) Napi súlygyarapodás; ( C ) Takarmány-átváltási arány (BWG/FI). ( D ) Napi takarmányfelvétel. Az értékek átlag ± SD-ként vannak feltüntetve. A kazein, szója és húsfehérje csoportok biológiai ismétlődéseinek száma 10, 10 és 40 volt. A ), lineáris regressziót hajtottunk végre a patkányok testtömegén. A patkányok kezdeti testtömegét ábrázoló megfogás nem különbözött a három csoporttól. A meredekség a patkányok növekedési sebességét és statisztikai szignifikanciáját jelzi (P

( A ) EATW: az epididymális zsírszövet abszolút tömege; EATW ​​/ BW: az epididymális zsírszövet relatív súlya a testtömeghez viszonyítva. ( B ) TC-L: a máj összes koleszterinszintje; TAG-L: triacil-glicerin a májban. ( C ) LW: a máj abszolút tömege; LW/BW: a máj és a test súlya közötti relatív tömeg. Az értékek átlag ± SD-ként vannak feltüntetve. A kazein-, szója- és húsfehérje-csoportok biológiai ismétlődéseinek száma 10, 10 és 40 volt. A sávok fölötti különböző betűk a P

( A ) Gének: szignifikáns szintet P-re állítottunk

A kazeinekhez, szója- és húsfehérjékhez képest különböző fiziológiai és molekuláris hatások indukálódtak patkányokban, ami az anyagcsere-egészség javulására utal, ami valószínűleg a szója- és húsfehérjék eltérő összetételének köszönhető. A szójafehérje a β-konglicin és a glicin keveréke, amely a teljes fehérje 90% -át teszi ki 19. A húsfehérjék szerkezetileg sokkal változatosabbak, miofibrilláris (50-55%), szarkoplazmatikus (30-34%) és kötőszöveti fehérjék (10-15%) 20 alkotják. A kazeinnel összehasonlítva a szója- és húsfehérjékben ezek a szerkezeti szempontból elkülönülő fehérjék valószínűleg másképp emészthetők, ami a gyomor-bél traktusból felszívódó peptidek sokféle tartományához vezet. Korábbi tanulmányunk kimutatta, hogy a különféle állatfajokból származó élelmiszer-fehérjék is specifikusan emésztettek, ami különböző peptidek termeléséhez vezetett a patkányok gyomrában és a jejunumban 21. A fehérjeösszetétel kivételével az AA-összetétel és különösen az élelmiszer-fehérjék EAA-frakciójának minőségi értékeléséhez szükséges legfontosabb kritériumok és markerek 22 .

Eredményeink szerint az étkezési szójafehérje szignifikáns fenotípusos változásokat indukált patkányokban, beleértve a jelentősen csökkent takarmányfelvételt és a súlygyarapodást. Ez azt jelenti, hogy a szójafehérje gátolhatja a patkányok étvágyát és növekedését, ami nem történt húsfehérjével etetett patkányokban. A korrelációs elemzés rendkívül pozitív korrelációt talált a súlygyarapodás és a takarmányfelvétel között (korrelációs együttható = 0,8, P 26. Ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy a szójafehérje növekedést gátló hatása az elfojtott takarmányfelvételnek köszönhető, amelyet metioninhiány indukálhat. valójában a diéta és a metionin korlátozása a szójafehérje csoportban jelentkezett, de a szójafehérjével táplált patkányok súlya 20% -kal kisebb volt, mint a kazeincsoporté, de csak 9% -kal kevesebb takarmányt fogyasztott, aminek eredményeként a testtömeg-grammonkénti takarmányfelvétel (0,65 g/g testtömeg) valójában magasabb volt a szójafehérje-csoportnál, mint a kazeincsoportnál (0,57 g/testtömeg-gát). Ezért valójában nem volt testsúlyon alapuló étrendi korlátozás, hanem csak a szójafehérje metionin-korlátozása volt csoport.

A testzsír csökkentését akkor ismerték el, ha a növekedéshez és fenntartáshoz szükséges energiaigény meghaladja az energiafogyasztást 35. Transzkripptikus eredményeink azt mutatták, hogy a máj energia-anyagcseréjét (oxidatív foszforiláció és elektrontranszportlánc) nem befolyásolták az étrendi húsfehérjék, összhangban a hússal táplált patkányok változatlan zsírtömegével. A húsfehérje-csoporttal ellentétben azonban az oxidatív foszforilációban és az elektrontranszportláncban szerepet játszó gének máj expressziója jelentősen megnőtt a szójafehérjével táplált patkányokban. Ugyanakkor ezek a gének szignifikánsan átfedésben voltak a Rictor célgénekkel, amelyekről azt gondolták, hogy a szójafehérje upstream szabályozójának felső gátlása (Z pontszám = -6,090). A Rictor az mTORC2 kulcsfontosságú szabályozó/strukturális alegysége, és fontos szerepet játszik a máj glikolízisének és lipogenezisének glükokináz és Srebfl által történő szabályozásában. Ezért úgy gondoljuk, hogy a szójafehérje testzsírcsökkenésre gyakorolt ​​hatása összefüggésben lehet a megnövekedett energia-anyagcserével és a Rictor és Srebf1 transzkripciós szabályozók által közvetített csökkent lipogenezissel.

Az inzulinrezisztencia a metabolikus szindróma egyik fő összetevője 37. Egy korábbi tanulmány szerint a szójafehérje csökkentheti a hasnyálmirigy inzulinszekrécióját, ami viszont összefüggésben volt a szójafehérje fogyasztása után a plazmában levő aminosavak mintázatával 38. Egyes epidemiológiai vizsgálatok szerint azonban az állati fehérjék növelhetik a cukorbetegség kockázatát 39. Uhe és mtsai. (1992) megállapította, hogy a szarvasmarha-, csirke- vagy halfehérje lenyelése nem változtatta meg az emberek inzulinszintjét 40. Ebben a tanulmányban azt tapasztaltuk, hogy a plazma inzulinszintjét mind a szója-, mind a húsfehérjék jelentősen csökkentették a kazeincsoporthoz képest, ami arra utal, hogy mind a szója-, mind a húsfehérjék potenciálisan befolyásolják az inzulinérzékenység javítását.

Anyagok és metódusok

Etikai nyilatkozat

Hím Sprague Dawley (SD) patkányokat vásároltunk a Kínai Tudományos Akadémia 3 hetes Sanghaji Állatkutató Laboratóriumában. Az állatokat párban, ellenőrzött környezetben, 12 órás világos-sötét ciklusban (12:12 óra fordított fény/sötét ciklus, 23 ° C) helyeztük el. Az állatkísérletet a Nanjing Mezőgazdasági Egyetem (Nanjing, Kína) és a Jiangsu Tartományi Agrártudományi Akadémia laboratóriumi állatok gondozásának és felhasználásának kézikönyve szerint hajtották végre (engedély száma SCXK (Su) 2002-0029 volt). Mindent kifejlesztettek a felhasznált állatok számának minimalizálása és szenvedésük minimalizálása érdekében. A patkányokat 1 héttel a vizsgálat előtt akklimatizálták, és a kísérlet során szabadon hozzáférhettek a vízhez és egy standard patkányhoz.

diéta

Asztal teljes méretben

Kísérleti protokoll

Amikor a patkányok megérkeztek a laboratóriumba, az összes patkányt standard AIN-93G táplálékkal etették 7 napig, hogy alkalmazkodjanak a tisztított étrendhez és az új környezethez. Ezt követően a patkányokat véletlenszerűen felosztották hat csoport egyikére (n = 10 csoportonként), azaz a kazein-, szója-, sertés-, marha-, csirke- vagy halcsoportokra. A patkányokat 7 napig etették e diétákkal. A testtömeget és a táplálékfelvételt 2 naponta mérték. A leölés napján a patkányokat 4 órával az áldozat előtt megfosztották az élelemtől, de szabad hozzáférést kaptak a vízhez. A patkányokat éter inhalációjával altattuk. A vért orbitális szúrással gyűjtöttük és a plazmát izoláltuk. Máj- és epididymális zsírszöveteket kapunk, megmérjük és folyékony nitrogénben gyorsfagyasztjuk. Az összes mintát az elemzésig -80 ° C-on tároltuk. A szója- és húsfehérjék és a kazein összehasonlításának megkönnyítése érdekében a négy húsfehérje-csoport összes adatait, beleértve a fiziológiai, a plazma- és a génexpressziós adatokat, egyesítettük és csoportként elemeztük. az egyes húsfehérjék.

A máj zsírtartalma és a plazma paraméterek kimutatása

A máj TAG és TC tartalmát a Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute-tól (Nanjing, Kína) vásárolt kereskedelmi készletekkel határoztuk meg. A TAG, TC, glükóz, karbamid és az összes fehérje plazmakoncentrációit Hitachi 7180 automatizált analizátorral (Tokió, Japán) elemeztük. A plazma inzulin koncentrációit radioaktív immunvizsgálattal határoztuk meg, amelyet a Pekingi Biológiai Technológiai Intézettől (Peking, Kína) vásároltunk. Az inzulinrezisztencia homeosztázis-modell (HOMA-IR) 47 meghatározását az IR = (éhomi inzulin mU/L × éhomi glükóz mM-ben)/22, 5. egyenlet alapján számoltuk ki. A plazma nélküli AA-koncentrációkat Hitachi L- 8900 AA analizátor. (Tokió, Japán).

A májban lévő génexpresszió profilozása RNS-szekvenálással

RNS izolálás, könyvtárépítés és szekvenálás

A teljes máj-RNS-t az RNAiso Reagent Kit (Takara, Dalian, Kína) segítségével izoláltuk. Minden csoportból három biológiai replikátum RNS-szekvenciáját bevezettük a BGI Tech-be (Shenzhen, Kína). Röviden, az izolált RNS mintákat DNáz I-vel kezeltük a DNS eltávolítása érdekében, és oligo (dT) mágneses gyöngyökkel dúsítottuk. Az MRNS-t rövid (kb. 200 bp) fragmensekre fragmentáljuk, és kétszálú cDNS-vé alakítjuk. A CDNA-t mágneses gyöngyökkel tisztítottuk, és az adaptereket ligáltuk a fragmensekhez. A fragmenseket PCR-amplifikációval dúsítottuk. A könyvtári termékeket egy Illumina HiSeq 2000 gépen (BGI, Shenzhen, Kína) szekvenáltuk.

A differenciálisan expresszált gének azonosítása

statisztikai módszerek

Az RNS-seq adatok kivételével az összes statisztikai elemzést az SPSS 16.0 (Chicago, IL) verziójával hajtottuk végre. Az étrend hatását a mért változókra egyirányú varianciaanalízissel (ANOVA) elemeztük, és az átlagokat összehasonlítottuk a legkevésbé szignifikáns különbség (LSD) többszörös összehasonlításával. A statisztikai szignifikanciát P-n határoztuk meg